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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币+5, BioEPI+1 2018-07-31 17:32:44
引用回帖:
5楼: Originally posted by 麻糖先生 at 2018-07-13 11:47:48
版主你好,在使用宝生物的盒子做RACE的过程中,①怎样的PCR是比较合适的呢?目前我尝试了说明书里的降落PCR和一般的PCR,效果都不是很显著,只有一个引物有微弱的条带,但是不足以将其纯化回收出来。另外,想请问一 ...

当然是能出现特异性条带的PCR是最好的,既然出来了淡淡拿的条带现在有两个方法:1、多P几管,之后过PCR柱式产物纯化试剂盒回收,2、设计特异性引物再进行巢式PCR。我建议你在用降落PCR的同时,多设计几个特异性引物多P几轮进行降落巢式PCR。构建文库我暂时还没做过,所以不做评价。设计引物时软件的评分作为一个参考,当然如果软件评分奇差的话,就建议换换位置设计。

“目前我是在靠近两端200bp以内设计的,并且优先考虑跟其他的物种较为同源的序列”这句话的意思是这个特异性引物设计是根据比对出来的?
PCR原装的酶确实效果很好,如果用完了的话可以考虑用“反转录酶 PrimeScript™ II Reverse Transcriptase”或者“反转录酶 PrimeScript™ Reverse Transcriptase”代替
UPM用完了可以参照网上的进行混合,但是要注意配置的时候用的离心管、枪头和水保证RNA Free的
6楼2018-07-13 13:27:40
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