| 查看: 3355 | 回复: 8 | ||
yuntaishan2008金虫 (正式写手)
|
[求助]
求助！！！精子RNA提取！！！！ 已有2人参与
|
|
我最近提精子RNA浓度可以但 A260/A280比值一直上不去，一般在1.5-1.65之间，这是什么问题，求各位大师指导?操作步骤如下： 1、将冷冻精子从液氮罐中迅速取出后，在37 °C水浴锅上30S内解冻到1.5mL无RNA酶的离心管中（样品量160ul），4°C条件下1000 r/min离心3 min,弃上清。2、用DEPC处理过的预冷到4°C的PBS缓冲液洗涤沉淀两次，1000 rpm/min离心3min,弃上清。 3、向沉淀中加入1ml的Trizol，祸旋震荡，在室温下静置5 min。 4、向离心管中加入20 uL β-硫基乙醇,混勻，65°C，水浴30 min,取出后冰浴1 min.。 5、向离心管中加入0.2 mL的氯仿，手动用力震荡15s，室温孵育10min，12000 rpm 4 °C离心15min。 6、离心后溶液分为三层，小心吸取上层水相至新的无RNA酶的离心管中。 7、二次氯仿抽提蛋白 8、向离心管中加入等体积的异丙醇，轻轻反复颠倒混勻，室温静置lOmin, 12000 rpm离心10 min。 9、离心后试管底部会出现沉淀，此为提取出来的RNA。小心弃去上清，缓慢的沿离心管壁加入DEPC水配制的75%的乙醇1 mL，切勿触及沉淀，轻轻上下颠倒洗涤离心管管壁，12000 rpm 4 °C离心5 min后小心弃去乙醇。 10、室温干燥燥沉淀2-3 min，使乙醇完全挥发，用30ulDEPC处理的水溶解沉淀后，于-80 °C保存备用。 |
回复此楼» 猜你喜欢
感觉普通人已经没办法玩了，躺平是唯一的出路。
已经有26人回复
-
江苏省优青门槛
已经有20人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有83人回复
-
心好累。今年我们部门提交了18个项目。中了11了，可惜我的又挂了
已经有10人回复
-
面上项目计划书
已经有7人回复
-
面上项目计划书附件
已经有9人回复
-
面上项目计划书系统状态
已经有18人回复
-
NSFC-UNEP（与联合国环境规划署）合作项目
已经有33人回复
-
和伊朗人合作
已经有32人回复
-
江苏省自然基金
已经有7人回复
-
生命科学新英文普刊《INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE》
已经有2人回复
yuntaishan20082楼2018-04-27 22:57:45
yuntaishan2008
金虫 (正式写手)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 999.1
- 散金: 14
- 红花: 3
- 帖子: 725
- 在线: 140.4小时
- 虫号: 321171
- 注册: 2007-03-10
- 性别: GG
- 专业: 生殖生物学
3楼2018-04-28 11:08:36
xiao2189818
金虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2062.1
- 散金: 1258
- 红花: 6
- 帖子: 763
- 在线: 101.1小时
- 虫号: 6300420
- 注册: 2017-04-12
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2020-07-23 17:08:11
yuntaishan2008
金虫 (正式写手)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 999.1
- 散金: 14
- 红花: 3
- 帖子: 725
- 在线: 140.4小时
- 虫号: 321171
- 注册: 2007-03-10
- 性别: GG
- 专业: 生殖生物学
5楼2021-07-26 21:00:01
wodezxn
金虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 4020.4
- 散金: 150
- 红花: 8
- 帖子: 816
- 在线: 137.6小时
- 虫号: 1272821
- 注册: 2011-04-21
- 性别: GG
- 专业: 生殖生物学
6楼2022-08-18 11:26:44
7楼2023-05-12 16:53:24
8楼2023-08-11 11:59:37
fengaiqin
铜虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 196.8
- 散金: 6
- 帖子: 215
- 在线: 349.3小时
- 虫号: 35395937
- 注册: 2024-04-26
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
9楼2024-05-07 11:13:41
