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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒提取问题，急！
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04swlcm

金虫 (小有名气)

[交流] 质粒提取问题，急！

我用TaKara的普通质粒提取试剂盒提取巨大芽孢杆菌的质粒（pHIS1525），提了好几次都没有跑出条带，是没条带！
我想请教大家一下原因？？？帮我提提意见！！！万分感谢！本人刚接触分子，感到很陌生，质粒没提出来，无法进行下一步实验，希望大家能帮帮我！
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1楼 2009-03-20 19:04:02
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月月大可

木虫 (著名写手)
说的详细些，这样大家好帮助你。按说试剂盒提应该比较好提。
使用了几毫升菌液？这个质粒我不太清楚，是严紧型还是松弛型？
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2楼2009-03-20 19:12:39
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h8872410kong

金虫 (小有名气)
不要急着做实验，先看看文献，和你做相似东西的别人怎么做的，理解了再动手，就算再遇到提问也会比较有针对性，太泛了不好回答，因为原因太多了
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3楼2009-03-20 19:25:54
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04swlcm

金虫 (小有名气)

回复： 月月大可

我提到3mL菌液
操作步骤按试剂盒进行，我用试剂盒提过大肠杆菌的质粒，效果不错
但提巨大芽孢杆菌就不好使，不知道是不是芽孢杆菌不好提质粒？需要加溶菌酶吗？
谢谢你们帮助
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4楼2009-03-20 20:11:44
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zl382

铁虫 (小有名气)
芽孢杆菌是阳性菌，细胞壁很厚的，普通碱裂解法不行，而商品化的试剂盒都是提阴性菌也就是根据常用的碱裂解法原理开发的，所以你提不出来是正常的
你还是用溶菌酶先处理掉细胞壁，然后配试剂提吧，阳性菌的东西是不好搞。
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后退，绝对是无路可走！
5楼2009-03-20 20:14:55
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森林7631

铜虫 (小有名气)
，今天刚和你一起做了，我以为我们会成功呢，但加溶菌酶后没有水浴，哈哈，下次肯定能成功，哈哈
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Time lost can not be recalled.
6楼2009-03-20 22:19:30
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