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RNA变性凝胶电泳
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| 请问RNA变性凝胶电泳的方法是什么？溶液具体怎么配置？麻烦吗？MOPS的作用是什么？ |
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4楼2009-03-22 06:59:49
2楼2009-03-20 19:51:42
sutao1979
木虫 (著名写手)
小木虫10年groupleader
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RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。在非变性电泳中，可以分离混合物中不同分子量的RNA分子，但是无法确定分子量。只有在变性情况下，RNA分子完全伸展，其泳动率才与分子量成正比甲醛变性胶： （1）0.1%DEPC水：200ml双蒸去离子水加0.2mlDEPC焦炭酸、二乙酯混匀，室温放置过夜，高压灭菌。 （2）10x电泳缓冲液。 吗啉代丙烷磺酸（MOPS） 0.4mol/L（pH 7.0） NaAc 0.1mol/L 乙二胺四乙酸(EDTA) 10mmol/L （3）50mL变性琼脂糖凝胶（1%） （4）10x电泳缓冲液 5 mL 琼脂糖 0.5 g 0.1%DEPC水 36.5 mL 加热溶解，稍冷却，加入8.5 mL 37%甲醛。 （5）上样缓冲液：50%甘油，1mmmol/LEDTA，0.4% 溴酚兰，0.4%二甲苯蓝。 （6）甲酰胺（去离子）。 制胶： 称取0.5g琼脂糖粉末，加入放有36.5mL的DEPC水的锥形瓶中，加热使琼脂糖完全溶解。稍冷却后加入5mL的10x电泳缓冲液、8.5mL的甲醛。然后在胶槽中灌制凝胶，插好梳子，水平放置待凝固后使用。 加样： 在一个洁净的小离心管中混合以下试剂：电泳缓冲液（10x）2μl、甲醛3.5mL、甲酰胺10mL、RNA样品3.5μl。混匀，置60℃保温10min，冰上速冷。加入3μl的上样缓冲液混匀，取适量加样于凝胶点样孔内。同时点RNA标准样品。 |
3楼2009-03-22 03:06:26
5楼2009-03-22 07:01:03