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RNA变性凝胶电泳
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| 请问RNA变性凝胶电泳的方法是什么?溶液具体怎么配置?麻烦吗?MOPS的作用是什么? |
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sutao1979
木虫 (著名写手)
小木虫10年groupleader
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RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。在非变性电泳中,可以分离混合物中不同分子量的RNA分子,但是无法确定分子量。只有在变性情况下,RNA分子完全伸展,其泳动率才与分子量成正比甲醛变性胶: (1)0.1%DEPC水:200ml双蒸去离子水加0.2mlDEPC焦炭酸、二乙酯混匀,室温放置过夜,高压灭菌。 (2)10x电泳缓冲液。 吗啉代丙烷磺酸(MOPS) 0.4mol/L(pH 7.0) NaAc 0.1mol/L 乙二胺四乙酸(EDTA) 10mmol/L (3)50mL变性琼脂糖凝胶(1%) (4)10x电泳缓冲液 5 mL 琼脂糖 0.5 g 0.1%DEPC水 36.5 mL 加热溶解,稍冷却,加入8.5 mL 37%甲醛。 (5)上样缓冲液:50%甘油,1mmmol/LEDTA,0.4% 溴酚兰,0.4%二甲苯蓝。 (6)甲酰胺(去离子)。 制胶: 称取0.5g琼脂糖粉末,加入放有36.5mL的DEPC水的锥形瓶中,加热使琼脂糖完全溶解。稍冷却后加入5mL的10x电泳缓冲液、8.5mL的甲醛。然后在胶槽中灌制凝胶,插好梳子,水平放置待凝固后使用。 加样: 在一个洁净的小离心管中混合以下试剂:电泳缓冲液(10x)2μl、甲醛3.5mL、甲酰胺10mL、RNA样品3.5μl。混匀,置60℃保温10min,冰上速冷。加入3μl的上样缓冲液混匀,取适量加样于凝胶点样孔内。同时点RNA标准样品。 |

3楼2009-03-22 03:06:26
2楼2009-03-20 19:51:42
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5楼2009-03-22 07:01:03













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