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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 急求诱导大分子蛋白的方法(120KD)
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yhxiang

金虫 (小有名气)

[交流] 急求诱导大分子蛋白的方法(120KD)

我在诱导一个GST融合蛋白,加上GST有120KD,我用过18度和37度诱导,融合蛋白都是在沉淀中,上清中都很弱.有没有什么可以提高大蛋白诱导效率的方法?现在急着得到凝胶阻滞的结果,但是蛋白纯乎不出来,愁!盼望高人指点一二,先在此谢过大家了
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向往从容淡定的生活
1楼 2009-03-20 16:54:32
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alexlv

银虫 (小有名气)
★
yhxiang(金币+1,VIP+0):谢谢帮助 3-24 10:16
为什么要凝胶阻滞的结果？蛋白上不是有GST,先用亲和呀。这么大的蛋白产量小是正常的呀，有可溶性表达已经很好了。
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2楼2009-03-20 17:25:36
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yhxiang

金虫 (小有名气)
我是想要纯化的蛋白做凝胶阻滞,需要的蛋白浓度在0.5ug/ul左右,但是我把上清和GST珠子孵育,洗脱之后几乎没有蛋白,我怀疑是蛋白浓度太低了,影响结合,但是高浓度的我现在还得不到,所以来向大家请将
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向往从容淡定的生活
3楼2009-03-20 19:40:54
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alexlv

银虫 (小有名气)
提高可溶性的方法很多，自己搜索就可以了，通常分子量比较大的蛋白用小分子Tag.
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4楼2009-03-23 15:49:31
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