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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 为什么加了酶切位点的PCR产物会出现两条带？
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无名研究僧

新虫 (初入文坛)

[交流] 为什么加了酶切位点的PCR产物会出现两条带？

载体构建，在目的基因ORF两侧加酶切位点（SmaI和ClaI），跑的高保真，目的片段应该在1600bp左右，然而跑胶准备胶回收之前发现条带有两条，一条在1500bp左右很亮，一条在2000bp左右比较暗，虫友们知道这是什么原因么？
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1楼 2018-04-23 19:21:08
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蝶恋花5280

铁虫 (小有名气)
★
无名研究僧(金币+1): 谢谢参与
我认为是加完酶切位点后，导致一条引物的错配
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4楼2018-04-23 20:17:02
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lllnnn118

禁虫 (初入文坛)
★
无名研究僧(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
3楼2018-04-23 19:39:55
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cry_2013

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引物特异性的问题吧
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12楼2018-04-25 16:25:32
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wuyiping

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没图不好判断，而且100bp没法看出来吧，所以你说的1500可能就是给你的目的基因，2000为非特异性扩增，建议直接切胶回收，然后测序

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13楼2018-04-27 02:20:48
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wdxmu8楼
2018-04-23 23:24   回复  
无名研究僧(金币+1): 谢谢参与
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