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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒
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嗨地瓜我是土豆

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒 已有2人参与

连接转化后提质粒做PCr为阳性，测序结果为阴性，酶切一条线，原因是什么？

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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1楼 2018-04-22 07:16:00
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-04-22 16:28:18
提质粒PCR你的引物一个用通用，另外一个用特异，这样会降低假阳性的喔

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2楼2018-04-22 08:58:55
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嗨地瓜我是土豆

新虫 (初入文坛)
我用的是特异性引物

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3楼2018-04-22 17:36:18
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cry_2013

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该就是没有连上吧，或者自连了，这样还是应该以酶切结果为准。2楼的意思是跨片段做PCR检测，就是用载体上一个的引物，目的基因上一个引物，这样扩出来的片段有载体上一部分，当然还包括目的片段，就可以减少片段自连（片段应该可以自连的）或载体自连而产生的假阳性结果了。
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4楼2018-04-23 15:40:13
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