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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助 TA克隆
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yuanfeng

金虫 (小有名气)

[交流] 求助 TA克隆

大家好 小弟最近在做TA克隆，用的TRANS peasy T载体 载体与片段比例为1：2，25度连接15分钟 可是第二天什么都没长。蓝斑和白斑都没有  大家有没有谁有也遇到过这种情况，给小弟支一下招吧   万分感谢
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1楼 2009-03-20 09:44:35
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xujiemeng

铜虫 (小有名气)
首先你做转化的时候有必要转个质粒作为对照，其次个人认为你连接时间太短了，我用的是TAKARA的PMD20-T载体一般16度是过夜连接，没有蓝白斑经常会遇到，但是对挑选阳性克隆影响不是很大。
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5楼2009-03-20 10:50:45
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
说不清道不明啊，重做吧，影响因素太多了，比如模板盐浓度影响，还有酶连的时间长点吧，酶不要加的太多，因为其中有甘油
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帮助虫友，提升自己
2楼2009-03-20 09:52:03
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
你先看下感受态有没有问题吧
转个空质粒进去先
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3楼2009-03-20 10:30:43
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yuanfeng

金虫 (小有名气)
刚做的感受态 验证过了 完全没问题
会不会载体有问题啊？
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4楼2009-03-20 10:47:45
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