应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒酶切后疑似降解
41/1返回列表
查看: 3497  |  回复: 3
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者Pokelypse将赠送您 5 个金币

Pokelypse

铁虫 (初入文坛)

[求助] 质粒酶切后疑似降解

想请教一下虫友们，质粒抽提酶切之后条带消失怎么办？
双酶切空载pGEX-6p-1，配成30μL体系用1μL BamH I和1μL Xho I（均是Takara Quickcut限制酶）在37℃水浴酶切3h，切完只有这个条带：

http://muchongimg.xmcimg.com/oss2/img/2018/0419/bw193h4579392_1524104882_196.png


然后做了对照，两组不加限制酶但加了10×酶切buffer，一组不加限制酶和10×酶切buffer而是用灭菌水补足20体积，都是30μL体系在37℃酶切3h，结果如下：

http://muchongimg.xmcimg.com/oss2/img/2018/0419/bw113h4579392_1524104965_382.png

结果很奇怪，前两组像是被切碎了，只加水的一组没有被切碎。

以上实验重复多次，结果均相同。

提质粒用的是5mL DH5α菌液，提质粒的试剂盒也是新的，buffer DW1和wash solution都洗了3遍，用60μL灭菌1×TE洗脱。Takara quickcut酶和10×green酶切buffer都是新拆封的，枪头也是进口灭菌的。空载质粒测序结果也是正确的。

求问可能是哪里出了问题？谢谢！

质粒酶切后疑似降解
Snipaste_2018-04-18_10-10-51.png


质粒酶切后疑似降解-1
Snipaste_2018-04-18_10-18-10.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼2018-04-19 10:37:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

diy患者

铁虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-05-06 09:54:06
这个现象确实奇怪，难道buffer里有dna酶？可以把buffer加热，查一下资料，估计60度10分钟就差不多了，buffer里的东西大部分都是耐热的，加热后不影响效果。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2018-05-04 15:30:29
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Pokelypse

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by diy患者 at 2018-05-04 15:30:29
这个现象确实奇怪，难道buffer里有dna酶？可以把buffer加热，查一下资料，估计60度10分钟就差不多了，buffer里的东西大部分都是耐热的，加热后不影响效果。

谢谢！我后来重新转入新制的DH5α感受态细胞，再次提质粒就没有问题了，可能是之前的DH5α菌有问题。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2018-05-05 15:23:06
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

起名字真难，

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Pokelypse at 2018-05-05 15:23:06
谢谢！我后来重新转入新制的DH5α感受态细胞，再次提质粒就没有问题了，可能是之前的DH5α菌有问题。...

楼主和你遇到相同的情况了，你是把提出来的质粒转到新的DH5α中，还是用新的菌株了？
赞一下 回复此楼
4楼2021-04-21 10:47:00
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Pokelypse 的主题更新
41/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫 SCI英文润色翻译-EnPapers美团队-先修改后付款
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 博士找工作真难 +15 sdsk47 2024-06-05 20/1000 2024-06-10 00:13 by 芝麻叶面条
[找工作] 今年的就业形势真的很差吗 +4 215747018 2024-06-07 5/250 2024-06-09 23:25 by ffffjjjj
[基金申请] C口食品 +4 好好不过分 2024-06-09 16/800 2024-06-09 22:08 by Pickfoot
[高分子] 懂的都来说说看，这是啥情况啊 +5 中国学院 2024-06-04 5/250 2024-06-09 22:05 by tiankongpi
[考博] 还能读上博士吗 +7 小伙走起 2024-06-09 11/550 2024-06-09 20:57 by 懒羊羊2024
[基金申请] G口yq发了吗 +9 nnyyxx 2024-06-03 11/550 2024-06-09 14:34 by oylb2
[基金申请] B01化学口的，近几年要什么样的评价才能上会呀？ +4 salmon95 2024-06-06 5/250 2024-06-09 09:45 by chem-cai
[有机交流] 席夫碱反应ph敏感 控制ph在多少呢？ 10+4 段sy 2024-06-05 5/250 2024-06-08 23:15 by 段sy
[教师之家] 郑雅婷这种将来估计也会举报自己工作单位领导 +12 苏东坡二世 2024-06-04 18/900 2024-06-08 19:24 by dxcharlary
[基金申请] 各位大佬帮忙看看F03青基5篇代表作什么水平？ +7 duboytd 2024-06-04 7/350 2024-06-08 16:25 by 学员NHuqdk
[教师之家] 最浪漫的事 (金币+5) +6 水冰月月野兔 2024-06-06 6/300 2024-06-07 16:32 by Quakerbird
[论文投稿] 求大神推荐医学相关的SCI 85+3 知识产权服务 2024-06-03 6/300 2024-06-07 06:25 by licheng78
[基金申请] B口yq答辩 +5 学员qYccD0 2024-06-05 6/300 2024-06-06 22:39 by 2673228047
[论文投稿] 博士学的是健康教育，需要自己找课题，哪位大神帮忙指导一下，选什么健康教育课题呢？ 30+3 lepeau 2024-06-05 5/250 2024-06-06 11:38 by nono2009
[论文投稿] 二审10天就Required Reviews Completed +6 2021035005 2024-06-03 12/600 2024-06-06 08:58 by 2021035005
[论文投稿] 不要投这个杂志Journal of materials science +5 蛋蛋198956 2024-06-04 5/250 2024-06-05 18:18 by nandi2212
[基金申请] 各位，F01口的YQ有收到通知的吗？ +3 zmm891258 2024-06-05 5/250 2024-06-05 17:06 by godlovewho
[考博] 有没有非全日制的博士 +3 原味儿咖啡 2024-06-03 4/200 2024-06-05 10:37 by 新晋码匠
[基金申请] E口人才项目发通知了么？ +3 linan2011 2024-06-04 3/150 2024-06-04 22:34 by hncxu
[有机交流] mitsunobu反应求助 15+4 cuicuicb 2024-06-03 5/250 2024-06-04 13:45 by yuanchang
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭