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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 酵母菌外源基因表达
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18758057961

新虫 (初入文坛)

[求助] 酵母菌外源基因表达

虫友帮帮忙！最近用pYES2构建重组基因载体，导入BY4741酵母，半乳糖诱导表达，跑蛋白电泳和对照组没有差异！不知为什么？反转录cDNA跑电泳也验证了有条带，～～～？？

@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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1楼 2018-04-13 21:31:05
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xtcao668

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
drwhoknowss: 金币+3, 鼓励交流 2018-04-13 23:27:45
酵母的话SDS中目标蛋白很多时候看不出来，要做western，基因上加标签。

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生活的理想就是理想的生活
2楼2018-04-13 22:54:57
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18758057961

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xtcao668 at 2018-04-13 22:54:57
酵母的话SDS中目标蛋白很多时候看不出来，要做western，基因上加标签。

谢谢，第一次做不懂多谢指教

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3楼2018-04-13 23:09:40
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18758057961

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 18758057961 at 2018-04-13 23:09:40
谢谢，第一次做不懂多谢指教
...

有没有什么方法可以提前知道这个基因可能表达了，再进一步做westblot？

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4楼2018-04-13 23:15:23
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 18758057961 at 2018-04-13 23:15:23
有没有什么方法可以提前知道这个基因可能表达了，再进一步做westblot？
...

RT-PCR，
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
5楼2018-04-13 23:28:08
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18758057961

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xtcao668 at 2018-04-13 22:54:57
酵母的话SDS中目标蛋白很多时候看不出来，要做western，基因上加标签。

大神，有没有具体步骤，怎么添加标签？怎么验证它表达了，跪谢:arm

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6楼2018-04-13 23:44:26
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18758057961

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-04-13 23:28:08
RT-PCR，...

做过了

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7楼2018-04-13 23:45:31
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
必须做wb验证才信

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8楼2018-04-14 09:40:13
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小花猫01

新虫 (初入文坛)
你好，我最近也在用PYES2构建重组质粒，一直构建不好，想请教一下你

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9楼2018-07-19 16:11:18
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