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xzxzacac110

新虫 (初入文坛)

[求助] 寻找跨膜蛋白的E3

各位大佬,我拿到了一个六次跨膜蛋白(尚未体外表达),检测该蛋白能够被泛素化修饰,现在关键问题是找到这个底物的E3,我看paper里面,一般找底物的E3或者找E3的底物,都用酵母双杂的方法,但是我这个是跨膜蛋白,酵母双杂貌似用不了。请问各位,有没有用过什么有效的方法?质谱靠谱吗?用质谱的话需要用MG132,或者别的什么条件处理细胞吗?万分感谢。
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onion77

新虫 (小有名气)

2楼2018-05-12 15:04:16
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xzxzacac110

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by onion77 at 2018-05-12 15:04:16
可以用pull down技术

这个蛋白体外一直表达不出来。另外,想请教一下,对于跨膜蛋白,有什么酵母双杂的改良版可以适用吗
3楼2018-05-15 20:15:32
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peanut7253

铜虫 (小有名气)

做出来了吗? 我觉得可以只表达目标区域,不表达完整的蛋白,减少跨膜的障碍
4楼2018-08-20 16:45:32
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