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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 单链DNA杂交退火冷却温度
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)

[求助] 单链DNA杂交退火冷却温度 已有2人参与

请教各位，两个DNA单链杂交制备双链DNA时，95度退火5min之后，缓慢冷却（1h）至25度以下是如何控制实现的？如果没有缓慢冷却会有什么后果吗？
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1楼 2018-04-03 14:24:43
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cm14704019

至尊木虫 (知名作家)
自己试试就知道结果了

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2楼2018-04-03 14:27:23
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cm14704019 at 2018-04-03 14:27:23
自己试试就知道结果了

怎么验证？我目前就是没有能够控制1h内缓慢降温，不知道会对后续有什么影响，所以才发帖咨询。片段很小，大概50bp。我是打算杂交成有粘性末端的DNA双链片段，用来做连接反应的。
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3楼2018-04-03 14:35:02
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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-04-03 21:20:16
baby1_9253344: 金币+5, ★★★很有帮助 2018-04-04 10:44:50
肯定是可以的，我们之前做sgRNA就是合成的单链退火成有bbsi酶切位点的粘性末端，后来测序验证的。缓慢降温可以用pcr仪设置。

不用特意去验证最后有没有退火成双链，双酶切载体不自连，单酶切用cip处理下，能连接成功的基本都没问题，最后看测序结果。祝好
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2019更好更棒!
4楼2018-04-03 15:30:32
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westcott0

新虫 (初入文坛)
你用一个金属加热器，在95度，关掉电源就行了

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5楼2018-04-03 18:01:26
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
baby1_9253344: 金币+5, ★有帮助 2018-04-04 10:43:45
缓慢冷却（1h）至25度的实现办法是：每分钟将5度。也就是设置PCR，每12秒降一度。具体设置，每个PCR不同，看说明吧
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
6楼2018-04-03 21:23:15
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by westcott0 at 2018-04-03 18:01:26
你用一个金属加热器，在95度，关掉电源就行了

我用的就是PCR仪，95度加热之后关闭电源，但我感觉它温度冷却的非常快
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7楼2018-04-04 10:46:53
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