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lzq999lzq

金虫 (著名写手)

[交流] 琼脂糖凝胶电泳时PCR产物与DNA ladder与匹配不上

每次凝胶电泳时PCR产物DNA ladder与位置对不上。

请问PCR产物在电泳前需要做预处理么?还是PCR产物是直接可以用来跑凝胶电泳?
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JAY张

新虫 (初入文坛)

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lzq999lzq: 金币+1 2018-03-31 15:33:30
产物对不上看看差多少,有时候会有偏差,但偏差不大(主要看产物长度)短链偏差不能明显,如果偏差比较明显,你就要考虑你的引物是否特异,是否P出来不是目的产物,有时候电泳跑不好,也会有偏差,PCR得看用什么试剂,有些例如TAKARA,赛默飞的PCR酶和BUFFER都已经加入了染色剂,具体是什么不能说喔,这些都可以直接电泳,如果购买的是没有染色剂的,则需要加入溴酚蓝和染料,跟跑DNA一样的,看BP大小选择胶的浓度即可
2楼2018-03-30 17:42:01
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

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★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
lzq999lzq: 金币+1 2018-03-31 15:18:07
lzq999lzq: 金币+1 2018-03-31 15:33:15
有时候ladder用的dye不见得是和你用在产物里的dye一样的 有不同的迁移率 比如neb的和thermofisher的就大概会差200bp
3楼2018-03-31 02:52:19
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lzq999lzq

金虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by fjtony163 at 2018-03-31 02:52:19
有时候ladder用的dye不见得是和你用在产物里的dye一样的 有不同的迁移率 比如neb的和thermofisher的就大概会差200bp

那如果用的是同一种dye呢?都是SYBR Green I.
4楼2018-03-31 15:18:32
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by lzq999lzq at 2018-03-31 15:18:32
那如果用的是同一种dye呢?都是SYBR Green I....

你说的是显色剂 我说的是在加样的时候不会加一种loading dye吗
5楼2018-04-01 00:09:45
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