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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 琼脂糖凝胶电泳时PCR产物与DNA ladder与匹配不上
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lzq999lzq

金虫 (著名写手)

[交流] 琼脂糖凝胶电泳时PCR产物与DNA ladder与匹配不上

每次凝胶电泳时PCR产物DNA ladder与位置对不上。

请问PCR产物在电泳前需要做预处理么？还是PCR产物是直接可以用来跑凝胶电泳？
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1楼 2018-03-30 16:26:03
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JAY张

新虫 (初入文坛)
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lzq999lzq: 金币+1 2018-03-31 15:33:30
产物对不上看看差多少，有时候会有偏差，但偏差不大(主要看产物长度）短链偏差不能明显，如果偏差比较明显，你就要考虑你的引物是否特异，是否P出来不是目的产物，有时候电泳跑不好，也会有偏差，PCR得看用什么试剂，有些例如TAKARA，赛默飞的PCR酶和BUFFER都已经加入了染色剂，具体是什么不能说喔，这些都可以直接电泳，如果购买的是没有染色剂的，则需要加入溴酚蓝和染料，跟跑DNA一样的，看BP大小选择胶的浓度即可
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2楼2018-03-30 17:42:01
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
lzq999lzq: 金币+1 2018-03-31 15:18:07
lzq999lzq: 金币+1 2018-03-31 15:33:15
有时候ladder用的dye不见得是和你用在产物里的dye一样的 有不同的迁移率 比如neb的和thermofisher的就大概会差200bp
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3楼2018-03-31 02:52:19
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lzq999lzq

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fjtony163 at 2018-03-31 02:52:19
有时候ladder用的dye不见得是和你用在产物里的dye一样的 有不同的迁移率 比如neb的和thermofisher的就大概会差200bp

那如果用的是同一种dye呢？都是SYBR Green I.
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4楼2018-03-31 15:18:32
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by lzq999lzq at 2018-03-31 15:18:32
那如果用的是同一种dye呢？都是SYBR Green I....

你说的是显色剂 我说的是在加样的时候不会加一种loading dye吗
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5楼2018-04-01 00:09:45
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