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beisimai895

木虫 (小有名气)

[交流] 关于测质粒浓度

本人在做同源重组,要把质粒转入宿主菌,现在碰到的问题是:同源时要求较高浓度的质粒,所以每次提质粒,为了保证质粒的量的要求,都用20微升的TE溶解,测质粒浓度时只取5微升稀释到3毫升,但是这样测出的值不在0.2~0.8之间,估计是稀释倍数太高的原因,但是我又不能拿太多的质粒去稀释,想向各位请教一下,如何才能不用太多质粒又能准确的测出质粒的浓度呢?
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allen8368

木虫 (正式写手)

方法一:换一台机器测  我只能说你的机器有点落后
方法二:可以不用稀释到3ml  注意看你的机器的光源在什么位置 试试看可以用尽量少的体积使其达到光源位置就可以了
方法三:同时提取2到3管质粒 混在一起 不就有50-60ul质粒啦 多一点稀释就好了
慢慢的认识你,再慢慢的忘记你...........
2楼2009-03-17 10:46:18
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beisimai895

木虫 (小有名气)

敢问楼上,有什么先进的仪器吗?说说,我看看能不能找到.我每次都是提20管质粒的,每管5微升,用试剂盒提的,不知道保守估计量大概有多少?
3楼2009-03-17 10:57:46
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allen8368

木虫 (正式写手)

我们实验室使用的beckman DU800 测核酸时体积为80微升 我一般使用2微升稀释40倍或者4微升稀释20倍
另外还有一台最新的Thermo 一般直接用2微升测量不用稀释 我想使用1微升可能也行
使用试剂盒提质粒效率很高啊 当然这和菌株还是有很大关系的  普通的大肠杆菌提取60ul洗脱浓度总该能达到100ng每微升吧
慢慢的认识你,再慢慢的忘记你...........
4楼2009-03-17 15:42:13
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beisimai895

木虫 (小有名气)

我每次都 是提20管,每管5毫升,最后混合为一管,用20微升TE溶解的,
5楼2009-03-18 08:31:19
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