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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xht

铜虫 (小有名气)

[交流] 表达蛋白大小问题

想请教各位大虾,我把一个900bp的基因插入到pet30a中,转化入BL21表达,目的蛋白大小应该是30k左右,为什么最后测酶活,发现有一个50多k的蛋白有活性,而大量表达的30多k的蛋白却没有活性。我跑的是SDS-PAGE,所以应该不会是二聚体,而且在没有这个基因,仅有空载体的BL21中没有这种活性,这究竟是怎么回事呢?
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


xht(金币+1,VIP+0):谢谢 5-27 22:33
(1)载体有无TAG
(2)你的蛋白的活性形式是否是二聚体
5楼2009-03-18 08:10:36
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


xht(金币+1,VIP+0):谢谢了,可是要怎么解释载体序列加蛋白本身序列,会产生我要的活性?如果一个单体大小是32左右,那二聚体可能是50多么?谢谢了 3-17 11:32
有些聚体是打不开的
是不是载体上还有一段序列也表达了
2楼2009-03-17 08:21:13
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xht

铜虫 (小有名气)

继续提问

可是这个大的蛋白是有活性的蛋白,怎么解释载体上的序列,加上蛋白基因本身的序列而产生的蛋白,却恰好有我要的活性呢?
如果一个单体大小是32左右,那二聚体可能是五十七八左右么?谢谢了

[ Last edited by xht on 2009-3-17 at 11:33 ]
3楼2009-03-17 11:30:08
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36678293

铜虫 (正式写手)

蛋白质之中是否有Cys?如果有的话,就极有可能!
4楼2009-03-18 02:17:21
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