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wangxuan

木虫 (著名写手)

[交流] PCR产物不能连T载体

我最近作反向PCR,扩增出的片段老是连不上T载体,请高手帮帮忙,不胜感激
(我回收的片段比较亮的,不应该练不上的阿)
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在其位,谋其政,成其事
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zl382

铁虫 (小有名气)

用什么酶扩得,如果不是Taq酶扩的,要补A后再连接T载体!
后退,绝对是无路可走!
2楼2009-03-16 16:37:45
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wangxuan

木虫 (著名写手)

我用的宝公司的ExTaq酶,一般情况下肯定能加上A尾巴的
在其位,谋其政,成其事
3楼2009-03-16 16:56:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

takara的T载体效果不好,promega的T-easy是最好的
4楼2009-03-16 19:38:31
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

如果是用Pfu扩增的话,如何在反应完了之后加A啊?
5楼2009-03-17 16:28:12
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livacin

铁虫 (正式写手)

继续学习中
6楼2009-04-08 10:43:25
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wjb725

不是说一般takara的酶不加A的吗?
7楼2009-04-08 15:15:14
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allen8368

木虫 (正式写手)

takara的酶也有些是扩增之后不加A的 这个用之前要仔细看看说明书
慢慢的认识你,再慢慢的忘记你...........
8楼2009-04-08 15:54:08
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amilie030312

金虫 (正式写手)

只要是Taq-bace的酶就是3‘加A的末端,如果是pfu-bace的酶那么一般都是3‘平末端的,混合酶就是混合末端的,如果想克隆入T载体那么必须有3’加A末端才能成功克隆,所以如果选用的是pfu-bace的酶则需要做一下3‘加A的实验才能做TA克隆。
9楼2009-04-08 16:45:52
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2008116068

木虫 (著名写手)

LATaq酶就不用加A了
只要踮起脚尖,就离太阳更近一点!!!
10楼2009-04-19 23:29:23
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