应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 基因插入失活后的表达情况（RT数据）求助
71/1返回列表
查看: 1406  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

痞子无敌

金虫 (正式写手)

[求助] 基因插入失活后的表达情况（RT数据）求助 已有3人参与

求教大神
本人敲除了一个基因，方法为: 在该基因CDS区域插入了一段抗性基因片段（带启动子终止子），同时缺失了该基因插入位点左右共100bp。
现在想知道: 这样做是不是算敲除了；然后，在插入位点前原基因的残留片段上设计RT引物，对该基因RT-PCR结果会是怎么样？2-△△CT可能是零还是可能是负还是可能是正.........？
最近实验做的都怀疑人生了..........
回复此楼

» 猜你喜欢
当你当你的眼睛眯着笑
1楼 2018-03-22 10:10:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

斑猪IS SB

禁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-03-23 07:54:19
痞子无敌: 金币+15, ★★★很有帮助, 谢谢~ 2018-03-28 14:53:06
本帖内容被屏蔽
2楼2018-03-22 15:04:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
3楼2018-03-22 15:29:01
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

小橙子的天空

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-03-23 07:54:40
我是利用同源重组做的基因缺失，设计的缺失片段不包含上下游基因的转录起始位点和聚腺苷酸化位点。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2018-03-22 20:00:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

痞子无敌

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 斑猪IS SB at 2018-03-22 15:04:37
让基因缺失100bp，看似是敲除了基因但是你无法保证剩余的基因基因是否还保留部分原基因的功能。

是这么个道理。然后做RT可以说明情况吗？
赞一下 回复此楼
当你当你的眼睛眯着笑
5楼2018-03-23 09:16:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

痞子无敌

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小橙子的天空 at 2018-03-22 20:00:41
我是利用同源重组做的基因缺失，设计的缺失片段不包含上下游基因的转录起始位点和聚腺苷酸化位点。

没有看懂............同学的意思是：缺失整个基因吗？你的同源臂设计在基因的那个部分，基因内部还是基因的前后两端？
赞一下 回复此楼
当你当你的眼睛眯着笑
6楼2018-03-23 09:18:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丶简简单单

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
痞子无敌: 金币+5, ★有帮助, 谢谢~ 2018-03-28 14:52:43
痞子无敌: 金币+8, ★★★很有帮助 2018-04-08 20:02:12
我们做基因敲除的方法是利用同源重组，在待敲除基因的上下游各取50bp+特异性引物作为PCR引物，p出一段含有同源序列的抗性片段，然后根据同源重组的原理就将基因敲除了。如果想做把抗性片段敲除，原理同上。我做的是原核的，相对简单些。仅供楼主参考。
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2018-03-27 16:22:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 痞子无敌 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +17 基诺咪客 2026-08-17 22/1100 2026-08-20 16:47 by 基诺咪客
[基金申请] 时间戳又变了 +11 wuchongjun 2026-08-20 14/700 2026-08-20 16:26 by 虫友是什么虫
[基金申请] 科研孤儿太难了 +4 我4大白菜 2026-08-20 4/200 2026-08-20 15:58 by 陈晨晨陈啊
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +9 zju2000 2026-08-16 10/500 2026-08-20 15:56 by Leogzhya
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] 言之凿凿，明天官网会通知放榜？ +14 医学老男孩 2026-08-20 16/800 2026-08-20 15:47 by LNP@mRNA
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +16 Ldrop2023 2026-08-13 20/1000 2026-08-20 11:07 by xskun
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 21/1050 2026-08-20 10:37 by Vivilian
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭