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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 基因插入失活后的表达情况（RT数据）求助
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痞子无敌

金虫 (正式写手)

[求助] 基因插入失活后的表达情况（RT数据）求助 已有3人参与

求教大神
本人敲除了一个基因，方法为: 在该基因CDS区域插入了一段抗性基因片段（带启动子终止子），同时缺失了该基因插入位点左右共100bp。
现在想知道: 这样做是不是算敲除了；然后，在插入位点前原基因的残留片段上设计RT引物，对该基因RT-PCR结果会是怎么样？2-△△CT可能是零还是可能是负还是可能是正.........？
最近实验做的都怀疑人生了..........
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当你当你的眼睛眯着笑
1楼 2018-03-22 10:10:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

斑猪IS SB

禁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-03-23 07:54:19
痞子无敌: 金币+15, ★★★很有帮助, 谢谢~ 2018-03-28 14:53:06
本帖内容被屏蔽
2楼2018-03-22 15:04:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
3楼2018-03-22 15:29:01
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

小橙子的天空

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-03-23 07:54:40
我是利用同源重组做的基因缺失，设计的缺失片段不包含上下游基因的转录起始位点和聚腺苷酸化位点。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2018-03-22 20:00:41
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痞子无敌

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 斑猪IS SB at 2018-03-22 15:04:37
让基因缺失100bp，看似是敲除了基因但是你无法保证剩余的基因基因是否还保留部分原基因的功能。

是这么个道理。然后做RT可以说明情况吗？
赞一下 回复此楼
当你当你的眼睛眯着笑
5楼2018-03-23 09:16:49
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痞子无敌

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小橙子的天空 at 2018-03-22 20:00:41
我是利用同源重组做的基因缺失，设计的缺失片段不包含上下游基因的转录起始位点和聚腺苷酸化位点。

没有看懂............同学的意思是：缺失整个基因吗？你的同源臂设计在基因的那个部分，基因内部还是基因的前后两端？
赞一下 回复此楼
当你当你的眼睛眯着笑
6楼2018-03-23 09:18:30
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丶简简单单

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
痞子无敌: 金币+5, ★有帮助, 谢谢~ 2018-03-28 14:52:43
痞子无敌: 金币+8, ★★★很有帮助 2018-04-08 20:02:12
我们做基因敲除的方法是利用同源重组，在待敲除基因的上下游各取50bp+特异性引物作为PCR引物，p出一段含有同源序列的抗性片段，然后根据同源重组的原理就将基因敲除了。如果想做把抗性片段敲除，原理同上。我做的是原核的，相对简单些。仅供楼主参考。
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2018-03-27 16:22:11
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