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求助 双酶切连接
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我们最近做双腿酶切连接,用Nco1和Hind3酶切载体和pcr产物3小时,然后用全式金T4连接酶25度连接15分钟。这里我做了两个,一个只加了酶切载体没加片段,另一个正常加,两者其它条件都一样。转化后涂板,12小时后,只加载体的长了很多 ,而正常加的几乎没长。请问这会是什么原因啊?谢谢大家啊。 双酶切条件应该没问题,前几天我切过,效果很好。 |
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