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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：LB/Kan平板上什么斑都不长？
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fengyuyaoye0708

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助：LB/Kan平板上什么斑都不长？

请问各位在做原核表达的朋友，为何我的平板上一个斑也没有长？我用的表达载体是PET-28a(+),感受态是BL21（DE3），连接体系是：载体5μl，目的片段5μl，Solution 1  10μl 共20μl。然后16度连接20小时。接着转化----涂板，在37度下培养了30多个小时，一个斑也没有。我不知道问题出在那里，因为是第一次做原核表达，敬请各位朋友支招解决现在遇到的问题！多谢各位！抗生素是卡那霉素，没有错！
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1楼 2009-03-14 16:50:53
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
自己设计对照试验确定原因
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2楼2009-03-14 19:14:51
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zl382

铁虫 (小有名气)
★
sutao1979(金币+1,VIP+0):谢谢参与 3-15 03:31
有可能是连接的问题，就是说没有连上，所以也自然就转不出来了；
还有就是转化是转化物的体积不要超过感受态体积的十分之一；
连接时总目的片断和载体片断的摩尔比控制在3：1左右；
还有就是在涂板时，将感受态细胞涂一个没有抗性的平板，确保感受态没有问题；
转化的详细步骤确保没问题。
赞一下(6人) 回复此楼
后退，绝对是无路可走！
3楼2009-03-14 19:51:48
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