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fengyuyaoye0708

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助:LB/Kan平板上什么斑都不长?

请问各位在做原核表达的朋友,为何我的平板上一个斑也没有长?我用的表达载体是PET-28a(+),感受态是BL21(DE3),连接体系是:载体5μl,目的片段5μl,Solution 1  10μl 共20μl。然后16度连接20小时。接着转化----涂板,在37度下培养了30多个小时,一个斑也没有。我不知道问题出在那里,因为是第一次做原核表达,敬请各位朋友支招解决现在遇到的问题!多谢各位!抗生素是卡那霉素,没有错!
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)

自己设计对照试验确定原因
2楼2009-03-14 19:14:51
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zl382

铁虫 (小有名气)


sutao1979(金币+1,VIP+0):谢谢参与 3-15 03:31
有可能是连接的问题,就是说没有连上,所以也自然就转不出来了;
还有就是转化是转化物的体积不要超过感受态体积的十分之一;
连接时总目的片断和载体片断的摩尔比控制在3:1左右;
还有就是在涂板时,将感受态细胞涂一个没有抗性的平板,确保感受态没有问题;
转化的详细步骤确保没问题。
后退,绝对是无路可走!
3楼2009-03-14 19:51:48
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