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dulei

木虫 (小有名气)

[交流] 菌落接液体不生长(菌落PCR时)

氨苄抗性筛选,长出菌落后,挑单菌落于10uL水中,然后取3uL做菌落PCR(剩余7uL放4度冰箱),挑选出好几个正确的克隆,然后把剩余的7uL菌液接液体(氨苄抗性50ug/ml),过夜都没见一点生长。什么原因?
另外,我用接种环从剩余的7uL菌液中蘸取菌液,划氨苄平板,只长出几个菌落。可能是7uL菌液中菌量太少,可是菌落PCR的电泳条带非常亮。有人说,可能7uL菌液放在冰箱里后,菌体沉到管的下方了,而划线和接液体时没有将菌体吸打上来,所以长不出来。
不知道,有没有哪位大侠也遇到过类似的问题,请指教一下。我都做了两次了,菌落PCR好不容易对了,结果接菌都没有菌落长出来。
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

7uL菌液放在冰箱里---这个原因比较大
但是,你这菌液实在是少的可怜,正常都是1-2ml小量培养,建议你重新挑菌落液体培养吧
会当凌绝顶,一览众山小
2楼2009-03-15 03:38:32
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mimisikai

金虫 (小有名气)


dulei(金币+1,VIP+0):12 3-21 12:50
PCR是个放大的过程,不具有可比性。
不用放冰箱,接菌前充分混匀,全量接,另外,最好划线活化下
3楼2009-03-15 10:19:24
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bcthomas

金虫 (初入文坛)

建议

建议别用水,用加氨苄的培养液保存试试
4楼2009-08-20 22:50:44
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

呵呵,不要重悬在水里面哦,可以考虑用 LB。

我一般是直接在平板上用牙签挑半个菌落,然后在平板底部编号,作菌落PCR。

平板保存于四度。菌落PCR阳性的,然后再挑取另外半个菌落于5ml的LB中过夜培养,

还没有出过问题呢。祝好运。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
5楼2009-08-21 01:18:39
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