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dulei木虫 (小有名气)
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[交流]
菌落接液体不生长（菌落PCR时）
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氨苄抗性筛选，长出菌落后，挑单菌落于10uL水中，然后取3uL做菌落PCR（剩余7uL放4度冰箱），挑选出好几个正确的克隆，然后把剩余的7uL菌液接液体（氨苄抗性50ug/ml），过夜都没见一点生长。什么原因？ 另外，我用接种环从剩余的7uL菌液中蘸取菌液，划氨苄平板，只长出几个菌落。可能是7uL菌液中菌量太少，可是菌落PCR的电泳条带非常亮。有人说，可能7uL菌液放在冰箱里后，菌体沉到管的下方了，而划线和接液体时没有将菌体吸打上来，所以长不出来。 不知道，有没有哪位大侠也遇到过类似的问题，请指教一下。我都做了两次了，菌落PCR好不容易对了，结果接菌都没有菌落长出来。 |
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