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真核基因的启动子调控区上游如何界定？实验困惑
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请教各位大神： 本人初步做了些启动子方面的研究，但是门外汉，自己摸索的，一知半解。有几个问题，在这里跟大家请教一下： （1）研究基因是从鱼类肝脏中获得的，在活体上其基因表达受细菌（或LPS）诱导，也可被环境污染物抑制表达； （2）通过NCBI上已经公布的该基因的基因组DNA序列信息，向上克隆获得了5‘端上游大约2500bp长度的序列（以ATG为+1计算的），如何知道是否扩到头了呢？这个长度做一般的实验是否足够了呢？ （3）启动子跟所谓的上游调控区应该是两码事吧？我克隆得到的序列，也没预测什么启动子，直接拿软件预测了一下转录因子结合位点。 （4）将获得的2500bp上游序列，构建至双荧光素酶载体上，转染细胞（因为没有该鱼的肝细胞系，采用了鲤鱼EPC细胞），分别进行LPS或环境污染物刺激，但重组质粒的启动子活性均没发生变化，也就是说，跟活体上的基因响应结果不一致？这如何解释呢？应该怎么处理？ 谢谢😊 |
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 虫友问答-分子生物 |
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