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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » HPLC 标准曲线不能定量
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yuq

金虫 (正式写手)

[交流] HPLC 标准曲线不能定量

前天用几种物质做了个混标浓度梯度标准曲线，线性很好，有4个9，但是当用里面的一种物质配了个浓度来验证时发现，计算出来的浓度是已知浓度的3倍，这到底是怎么回事啊？我的浓度绝对没有配错，我那个单标又重新配了好几次来测，计算出来的就是不是我配的浓度，数据是waters自己处理的，没有人为误差。

另外还有个问题：我的混标中，其他几种物质在同一浓度下峰都差不多高，而有一种却是峰很低，更奇怪的是它随着浓度的增加，反而峰越来越小，这是怎么回事？是不是还是说明我的混标配的有问题啊？

最后我的混标峰中，有些物质分的不是很开，是不是对于计算峰面积也有影响啊？
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1楼 2009-03-13 23:23:05
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ly2199

专家顾问 (正式写手)
★ ★ ★
佳怡(金币+3,VIP+0):感谢参与讨论 3-17 08:55
我觉得有以下几种可能：
1.你说你的混标有的分得不是很开，对于标样来说，一定要保证各个物质打到基线分离，否则你的峰面积就不会很准的，这很可能是你后来计算不准确的主要原因
2.还有你在进样时是否用的是定量环呢，还是自动进样，如果是这两种情况的话，应该说进样方面的误差会小一些，否则纯粹手动进样的话，有可能会带来误差，
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2楼2009-03-14 10:15:41
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yuq

金虫 (正式写手)
大家觉得这样的解释怎么样？

【用的是waters empower软件，可能的原因是你建立处理方法时，在选择线性的哪一步选择了默认的“线性”计算方式，如果选择默认的“线性”方式，可能会出现浓度高于正常、正常、低于正常三种情况。我也是最近才遇见的。要解决其实很简单，在选择线性哪一步，选择“线性过原点”方式，就不会出现浓度大3倍的情况。】
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3楼2009-03-14 19:16:37
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panshi3000

金虫 (小有名气)
★ ★
佳怡(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论 3-17 08:55
同意上述言论.但有一点小问题,无论是混标,还是测其中一种物质,你的检测波长都要一定(举个例子,检测器不同,道理一样),因为不同波长的吸光系数是不同的.三倍浓度可能是这原因.
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4楼2009-03-16 02:08:14
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sjq10

铜虫 (初入文坛)
吸收波长都保证是一样就是了   对最后结果应该没有影响吧 ！只是 最大吸收而已  是不是灵敏度而已
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5楼2009-03-16 10:29:09
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sjq10

铜虫 (初入文坛)
★
佳怡(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论 3-17 08:56
吸收波长都保证是一样就是了   对最后结果应该没有影响吧 ！只是 最大吸收而已   ，灵敏度不高而已
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小木虫让我们更多的人为了知识而团聚，相信这里给你提供更多的资料和解答疑问的机会
6楼2009-03-16 10:31:47
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