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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 目的基因与质粒经过酶切连接后，怎么确定连接上了？
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x8m8q8

新虫 (小有名气)

[求助] 目的基因与质粒经过酶切连接后，怎么确定连接上了？ 已有3人参与

目的基因与质粒经过酶切连接后，怎么确定连接上了？
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1楼 2018-03-15 15:27:40
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daijianhui

新虫 (初入文坛)
最简单办法就是跑胶，看下片段范围
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2楼2018-03-15 15:30:23
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705369449

银虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-03-16 07:52:36
转化，涂平板，挑菌PCR，摇菌，测序。

发自小木虫IOS客户端
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3楼2018-03-15 15:32:38
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x8m8q8

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by daijianhui at 2018-03-15 15:30:23
最简单办法就是跑胶，看下片段范围

那这个片段范围就是目的基因大小与质粒大小之和吧?
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4楼2018-03-15 15:39:40
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xuyuzhi

新虫 (正式写手)
不行啊。转化，挑菌，测序就行

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17343151072目前在一道生物，常联系
5楼2018-03-15 16:15:13
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zyfskj

新虫 (著名写手)
不是讲过么

发自小木虫IOS客户端
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向我乞求怜悯吧，我会狠狠拒绝的。
6楼2018-03-15 17:29:07
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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
转化涂抗生素选择性培养板，首先要能长出单克隆。
验证方法：1.菌落pcr；2.单酶切跑电泳；3.送菌液或质粒测序
最终都是要通过测序验证，所以1/2可省略，直接3。
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2019更好更棒!
7楼2018-03-15 20:10:15
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whxuan

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

最后还得看表达目的蛋白或构建菌株表达水平，还得把菌筛选出来
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8楼2018-03-22 15:25:19
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悦悦饼饼

新虫 (小有名气)
转化，挑斑，摇菌，菌P，酶切检测，测序

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9楼2018-03-22 16:20:49
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王查查23

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
10楼2018-03-23 07:56:28
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