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jessy_zxy

金虫 (小有名气)

应助: 6 (幼儿园)
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在线: 29.2小时
虫号: 2321152

[交流] 用枯草芽孢杆菌的菌液做qPCR做了个什么鬼出来啊

最近在对枯草芽孢杆菌做荧光定量PCR 实验，做了三批，每一批的扩增曲线都是直的，结果显示没有Ct 值，内参基因没有，目的基因也没有。第一批我直接在体系里加菌液，第二批将菌液沸水煮沸10min 再加入到反应体系里的，第三批直接用超声破碎处理菌液的。这么折腾都没有结果……还有一个很奇怪的点是有几个样没有Ct值却跑核酸胶显示有正确大小条带，很奇怪？
我怀疑是不是退火温度太高，于是将退火温度降低，还是没有Ct值，嗯，就是这么任性的没有！
我师兄说是不是直接上菌液太粗犷了？是不是直接提取全DNA 以此为模板才能扩增出来？
请问各位虫友们有直接用菌液做过qPCR 的吗？能否指教我一下，不甚感激！

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1楼2018-03-14 14:59:34

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忧伤的萤火虫

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 464.3
帖子: 20
在线: 27.4小时
虫号: 2613872

★
jessy_zxy(金币+1): 谢谢参与

菌液PCR是没有问题的，目前这种情况首先要确定你设计的引物是不是能够扩出来你的目的片段，建议先做个普通PCR，做个引物浓度梯度和退火温度梯度的实验，验证一下你引物的效率先。。。。

4楼2018-04-17 12:22:56

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