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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 核酸5'端磷酸化作用
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wenyi2015

银虫 (正式写手)

[求助] 核酸5'端磷酸化作用

刚读了一篇文献发现问题：PCR扩增目的片段，用T4 polynucleotide kinase处理，再用EcoRV和Kpni双酶切，最后与同样双酶切的质粒进行连接，请教5'端磷酸化有什么作用？

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1楼 2018-03-07 15:46:17
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aishida

禁虫 (职业作家)
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wenyi2015
2楼2018-03-07 15:47:22
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露水繁星

新虫 (正式写手)
提供3'羟基

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3楼2018-03-07 15:48:17
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wenyi2015

银虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by aishida at 2018-03-07 15:47:22
质粒环化

谢谢您，麻烦再说的具体一些吧，我刚接触分钟克隆，不是很理解....

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4楼2018-03-07 16:01:54
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wenyi2015

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 露水繁星 at 2018-03-07 15:48:17
提供3'羟基



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5楼2018-03-07 16:02:27
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aishida

禁虫 (职业作家)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-03-08 07:55:04
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wenyi2015
6楼2018-03-07 16:15:05
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wenyi2015

银虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by aishida at 2018-03-07 16:15:05
pcr扩增得到的条带经过磷酸化能与酶切之后的质粒片段连接，形成3,-5,磷酸二酯键，变成环形质粒

哦...明白了，但还有一个问题，有的文献上PCR扩增片段直接酶切，再与相同酶切的质粒连接，也就是没有中间磷酸化步骤，不太明白这两者的区别？

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7楼2018-03-07 16:20:54
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aishida

禁虫 (职业作家)
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8楼2018-03-07 17:41:16
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wenyi2015

银虫 (正式写手)
文献中酶切之后就是链接，没有其他步骤....

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9楼2018-03-08 11:43:19
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