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wenyi2015

银虫 (正式写手)

[求助] 核酸5'端磷酸化作用

刚读了一篇文献发现问题:PCR扩增目的片段,用T4 polynucleotide kinase处理,再用EcoRV和Kpni双酶切,最后与同样双酶切的质粒进行连接,请教5'端磷酸化有什么作用?

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aishida

禁虫 (职业作家)

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2楼2018-03-07 15:47:22
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露水繁星

新虫 (正式写手)

3楼2018-03-07 15:48:17
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wenyi2015

银虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by aishida at 2018-03-07 15:47:22
质粒环化

谢谢您,麻烦再说的具体一些吧,我刚接触分钟克隆,不是很理解....

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4楼2018-03-07 16:01:54
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wenyi2015

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 露水繁星 at 2018-03-07 15:48:17
提供3'羟基



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5楼2018-03-07 16:02:27
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aishida

禁虫 (职业作家)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-03-08 07:55:04
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6楼2018-03-07 16:15:05
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wenyi2015

银虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by aishida at 2018-03-07 16:15:05
pcr扩增得到的条带经过磷酸化能与酶切之后的质粒片段连接,形成3,-5,磷酸二酯键,变成环形质粒

哦...明白了,但还有一个问题,有的文献上PCR扩增片段直接酶切,再与相同酶切的质粒连接,也就是没有中间磷酸化步骤,不太明白这两者的区别?

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7楼2018-03-07 16:20:54
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aishida

禁虫 (职业作家)

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8楼2018-03-07 17:41:16
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wenyi2015

银虫 (正式写手)

文献中酶切之后就是链接,没有其他步骤....

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9楼2018-03-08 11:43:19
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