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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » RT-PCR
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虫子739

铁虫 (小有名气)

[交流] RT-PCR

RT-PCR需要获得1500bp左右的片段，可是我做了几次反转录都没出现目的条带。用内参引物做的RT-PCR，条带与理论相符合。是因为目的条带太大？还是目的基因的转录水平太低？PCR的条件是不是要很特殊，希望有经验的同仁指点迷津！谢谢！~
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1楼 2009-03-11 16:19:18
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sail000000

铜虫 (小有名气)
★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来~ 3-14 01:00
引用回帖:
Originally posted by 虫子739 at 2009-3-11 16:19:
RT-PCR需要获得1500bp左右的片段，可是我做了几次反转录都没出现目的条带。用内参引物做的RT-PCR，条带与理论相符合。是因为目的条带太大？还是目的基因的转录水平太低？

做内参能做出来说明你的模板是没问题的，目的条带不出来可能是你的体系、程序没找对，还有可能是表达量太低。
你做的如果是别人做过的已知基因，你可以看看别人文献里有没有做表达分析的，看看你的基因有没有基础表达，如果是诱导才表达、生长的某一个时段才表达的话，你就要找准采样的时间了！
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7楼2009-03-14 00:55:24
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
sutao1979(金币+1,VIP+0):应该是这样 3-11 17:35
RT检测表达量无需扩这么长，不超过500bp
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2楼2009-03-11 16:28:16
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亦木水

铜虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):辛苦,欢迎常来~ 3-14 00:59
我现在遇到同样的问题，我的目的条带是2.5kb的，已经做了快一个月了
可以检查RNA的纯度
把RT-PCR第一步逆转录所得cDNA电泳，看是否有结果
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3楼2009-03-12 00:06:13
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虫子739

铁虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):鼓励新虫~ 3-14 00:59
cDNA电泳回出现条带吗？要是那样能出来了，我们不就可以不作PCR了？直接做RT就好了。
你那样电泳有结果吗？
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4楼2009-03-13 18:14:54
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