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丫2016

新虫 (小有名气)

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送样测的数据，excel表中有标准曲线，ct值，拷贝数。怎么确定那个细菌的数量？有计算公式么，求参考文献分享。

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1楼 2018-02-27 21:10:03

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wanglei512

金虫 (正式写手)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小冀-: 金币+5, 鼓励回帖，有帮助 2019-01-28 17:12:55

1、先测定标准质粒的浓度，再结合标准质粒碱基数计算拷贝数
2、标准曲线有对应的标准方程（y=ax+b）,y是质粒拷贝数，X是Ct值，把Ct值代入方程，就是对应的拷贝数
一、分步推理如何计算核酸拷贝数
1A260吸光度值=dsDNA 50ug/ml=ssDNA 33ug/ml=ssRNA 40ug/ml
核酸浓度＝(OD260)×稀释倍数×(33 或 40 或 50)=ng/ul
MW 代表克/摩尔，单位 dolton：1dolton 即表示 1g/mol
1 摩尔=6.02×1023摩尔分子(拷贝数)
平均分子量(MW)：dsDNA=碱基数×660 道尔顿/碱基
ssDNA=碱基数×330 道尔顿/碱基
ssRNA=碱基数×340 道尔顿/碱基
得到拷贝数计算公式：6.02×1023拷贝数/摩尔×(浓度)/(MW g/mol)= copies/ml.
即(6.02×1023)×(g/ml)/(DNA length×660)=copies/ml.
或(6.02×1023)×(ng/ul×10-9)/(DNA length×660)=copies/ul.
例：3000 碱基质粒，浓度 100 ng/ul
MW=3000bp×660dalton/bp=1.98×106daltons，即 1mol=1.98×106g(100ng×10-9)g/1.98×106＝摩尔数
copy 数＝摩尔数×6.02×1023＝3×1010copies/ul.
如何计算拷贝数？
计算方法：(6.02×1023拷贝数/摩尔)×(浓度 g/ml)/(MW g/mol)=copies/ml
[平均分子量(MW g/mol)：dsDNA=(碱基数)×(660 道尔顿/碱基)；ssDNA=(碱基数)×(330 道尔顿/碱基)；ssRNA=(碱基数)×(340 道尔顿/碱基)]