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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 荧光定量结果分析
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丫2016

新虫 (小有名气)
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荧光定量结果分析
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送样测的数据，excel表中有标准曲线，ct值，拷贝数。怎么确定那个细菌的数量？有计算公式么，求参考文献分享。

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1楼 2018-02-27 21:10:03
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DNA爱Dnase

新虫 (著名写手)
什么意思？

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12楼2018-02-27 21:29:32
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丫2016

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by DNA爱Dnase at 2018-02-27 21:29:32
什么意思？

你好，感谢你的回复！我现在是本科生，对于这些我还不是很懂。我送样对土壤细菌进行定量分析，得到数据结果，结果ecxel表中有标准曲线，CT值和拷贝数。要怎么进行定量分析呢？

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13楼2018-02-27 21:43:33
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DNA爱Dnase

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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14楼2018-02-27 21:56:46
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丫2016

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by DNA爱Dnase at 2018-02-27 21:56:46
你把邮箱给我，我给你发一些资料

师兄我加你扣扣了

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15楼2018-02-27 22:22:59
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1073192874

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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14楼: Originally posted by DNA爱Dnase at 2018-02-27 21:56:46
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您好  我也正要做这个，不是很懂，能不能也发我一份 非常感谢1073192874@qq.com
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16楼2018-10-09 15:30:53
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洛玉

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by DNA爱Dnase at 2018-02-27 21:56:46
你把邮箱给我，我给你发一些资料

您好??我也正要做这个，不是很懂，能不能也发我一份 非常感谢！2461808441@qq.com.

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17楼2018-11-14 10:27:03
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好奇％！

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by DNA爱Dnase at 2018-02-27 21:56:46
你把邮箱给我，我给你发一些资料

您好。我也需要荧光定量的资料，求分享。谢谢

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18楼2019-01-18 11:36:27
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好奇％！

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 好奇％！ at 2019-01-18 11:36:27
您好。我也需要荧光定量的资料，求分享。谢谢
...

1253236264@qq.com

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19楼2019-01-18 11:36:46
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wanglei512

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小冀-: 金币+5, 鼓励回帖，有帮助 2019-01-28 17:12:55
1、先测定标准质粒的浓度，再结合标准质粒碱基数计算拷贝数
2、标准曲线有对应的标准方程（y=ax+b）,y是质粒拷贝数，X是Ct值，把Ct值代入方程，就是对应的拷贝数
一、分步推理如何计算核酸拷贝数
1A260吸光度值=dsDNA 50ug/ml=ssDNA 33ug/ml=ssRNA 40ug/ml   
核酸浓度＝(OD260)×稀释倍数×(33 或 40 或 50)=ng/ul
MW 代表克/摩尔，单位 dolton：1dolton 即表示 1g/mol                             
1 摩尔=6.02×1023摩尔分子(拷贝数)
平均分子量(MW)：dsDNA=碱基数×660 道尔顿/碱基
ssDNA=碱基数×330 道尔顿/碱基
ssRNA=碱基数×340 道尔顿/碱基
得到拷贝数计算公式：6.02×1023拷贝数/摩尔×(浓度)/(MW g/mol)= copies/ml.
即(6.02×1023)×(g/ml)/(DNA length×660)=copies/ml.   
或(6.02×1023)×(ng/ul×10-9)/(DNA length×660)=copies/ul.
例：3000 碱基质粒，浓度 100 ng/ul
MW=3000bp×660dalton/bp=1.98×106daltons，即 1mol=1.98×106g(100ng×10-9)g/1.98×106＝摩尔数                             
copy 数＝摩尔数×6.02×1023＝3×1010copies/ul.
如何计算拷贝数？
计算方法：(6.02×1023拷贝数/摩尔)×(浓度 g/ml)/(MW g/mol)=copies/ml
[平均分子量(MW g/mol)：dsDNA=(碱基数)×(660 道尔顿/碱基)；ssDNA=(碱基数)×(330 道尔顿/碱基)；ssRNA=(碱基数)×(340 道尔顿/碱基)]
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20楼2019-01-28 16:50:11
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成甜汁er2楼
2018-02-27 21:10   回复  
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insist85283楼
2018-02-27 21:10   回复  
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jixiangbao4楼
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cifer12305楼
2018-02-27 21:11   回复  
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104.5?@水6楼
2018-02-27 21:11   回复  
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shally12347楼
2018-02-27 21:12   回复  
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seuwater8楼
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甄士隐2079楼
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andrewhf10楼
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润色论文11楼
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