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snoopytbw

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[交流] 新型体外诊断技术-Sherlock技术已有2人参与

Sherlock技术的原理实际上主要是利用Cas13a蛋白（又叫做C2C2）的一种叫做“collateral effect”的效应，简单说来就是，当Cas13a和crRNA结合，并识别相应的RNA序列之后，就激活了Cas13a的RNA酶活性，能够切割其他所遇到的任何RNA，这就是所谓的‘collateral effect’。此时，这个酶就会剪切一个荧光报告基团（quenched fluorescent RNA，实际上是一种高灵敏的检测RNA酶活性的试剂，正常情况下不发光，一旦被RNA酶剪断，就会发光，然后只需要检测到荧光就能够判断是否具有RNA酶活性了），然后发光，其后就可以被检测了。

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▲Sherlock技术原理

Sherlock技术中最重要的蛋白质，Cas13a的发现历程是怎样的呢？

实际上，最早在2015年，张锋实验室通过比对class2型的蛋白序列，发现Cas13a与种不同，其不具有Ruvc结构域，即没有DNA酶活性，但是具有两个HEPN结构域，众所周知，HEPN结构域具有RNA酶活性，因此，推测Cas13a具有RNA酶活性。

而他们进一步在2016年4月就在《科学》杂志上面报道了Cas13a是一个RNA介导的RNA酶。

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▲张锋团队2016年4月就在《科学》杂志上面报道了Cas13a是一个RNA介导的RNA酶

然而，戏剧性的是，竞争对手杜德拉教授则是在短短几个月之后，就在《Nature》上面发表相关文章。杜德拉实验室更进一步，证明Cas13a具有两种RNA酶活性，一种是切割pre-crRNA称为成熟crRNA酶活性，一种是HEPN结构域的RNA酶活性。

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▲杜德拉教授团队则是在短短几个月之后，就在《Nature》上面发表相关文章，第一次将Cas13a应用于基因检测，然而灵敏度太低

当Cas13a和crRNA结合，并识别相应的RNA序列之后，就激活了Cas13a的RNA酶活性，能够切割其他RNA，这就是所谓的‘collateral effect’。因此，他们首次将Cas13a应用于检测RNA，也采用的猝灭荧光的RNA作为报告基团的。然而，当时杜德拉实验室的检测灵敏度仅能够达到nM级别，没有实际应用价值。所以说，单纯使用Cas13a检测灵敏度太低，无使用价值。

http://mp.weixin.qq.com/s/sI24xdNLqC9_5MtrtcfZEw

发自小木虫Android客户端

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