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lqjsunny

新虫 (小有名气)

[求助] smart-seq2技术细节咨询已有1人参与

各位大神,
        有做过Smart-Seq2技术分离单细胞的吗?你们在 Ampure XP beads纯化后,一般一个细胞能够得到多少ng的DNA?
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lqjsunny

新虫 (小有名气)

送红花一朵
我们不知道是不是磁珠回收的时候没有洗干净,导致单细胞扩增的阴性对照(即没有细胞的PCR产物)回收之后测浓度也有数值,和样品回收的总产量差不多。猜测除了污染以外还有没有其他原因?大神有没有遇到过。这样回收下来,单个细胞经过20轮的PCR 扩增之后总产量能达到200ng.多的有点不敢让人相信啊。求大神指点!多谢!
3楼2018-02-16 23:09:50
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
???单细胞才几皮克啊。。。你是做到最后吗?最后整个流程结束10ng左右
2楼2018-02-11 14:51:29
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by lqjsunny at 2018-02-16 23:09:50
我们不知道是不是磁珠回收的时候没有洗干净,导致单细胞扩增的阴性对照(即没有细胞的PCR产物)回收之后测浓度也有数值,和样品回收的总产量差不多。猜测除了污染以外还有没有其他原因?大神有没有遇到过。这样回收 ...

你没有回复我,是我自己回顾自己的答案发现你回复。。我的天
我也试过,阴性出污染了,那就真的是污染了,没办法,只能灭菌一整套,2000mg/L有效氯擦拭,紫外照射,酒精喷洒,单独一个房间做这些步骤,最重要是有效氯喷洒,有刺激性的要小心不要进眼睛,喷完后,隔天才能通风。
4楼2018-02-22 15:12:35
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by bbqlhb at 2018-02-22 15:12:35
你没有回复我,是我自己回顾自己的答案发现你回复。。我的天
我也试过,阴性出污染了,那就真的是污染了,没办法,只能灭菌一整套,2000mg/L有效氯擦拭,紫外照射,酒精喷洒,单独一个房间做这些步骤,最重要是有 ...

做完这些,发现还是污染了。就换水,在挑取细胞的PBS里出问题,更换。大概就这些污染地方了
5楼2018-02-22 15:14:56
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