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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 总RNA提取，还是不干净，求助
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whwei321

至尊木虫 (著名写手)

小虫
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
感觉提的还可以，最有可能的原因是反转或者引物设计有问题

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

Korea??
坚持就是胜利
11楼2018-02-10 07:06:03
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cifer1230

金虫 (著名写手)

cifer1230
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有时候就是这样，莫名其妙的，RNA可能就提不好，但是不能只看仪器测的浓度，比值啥的，反转录下能出结果就行。
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Korea??
.....
12楼2018-02-13 22:24:55
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Korea??

新虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by whwei321 at 2018-02-10 07:06:03
感觉提的还可以，最有可能的原因是反转或者引物设计有问题



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13楼2018-02-13 23:13:52
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Korea??

新虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by cifer1230 at 2018-02-13 22:24:55
有时候就是这样，莫名其妙的，RNA可能就提不好，但是不能只看仪器测的浓度，比值啥的，反转录下能出结果就行。

好的，过了年试试。谢谢

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14楼2018-02-13 23:14:37
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RedBlack_m

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
RNA的图看起来 应该是降解了 你查一下 28s和18s的比例应该是多少就知道了。

用RNA 跑一遍PCR就知道gDNA的污染情况。

当然你也可以设计一个跨内含子的house keeping gene的primer 用你的CDNA跑一遍PCR。
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15楼2018-02-14 19:43:36
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Korea??

新虫 (正式写手)
我还不会设计引物

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16楼2018-02-14 21:49:37
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沐枫之城

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看图来说RNA提取的应该没问题，完全可以用来做RT-PCR的，个人感觉你的问题应该是反转没有成功，你先按照其他人说的反转扩下actin基因啥的看能不能扩出来
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17楼2018-02-21 00:11:32
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Korea??

新虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 沐枫之城 at 2018-02-21 00:11:32
看图来说RNA提取的应该没问题，完全可以用来做RT-PCR的，个人感觉你的问题应该是反转没有成功，你先按照其他人说的反转扩下actin基因啥的看能不能扩出来

是的，我又重复了一遍，发现上次应该是少了一个试剂(primer).谢谢您的关注！

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18楼2018-02-21 12:28:51
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Korea??

新虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by cifer1230 at 2018-02-13 22:24:55
有时候就是这样，莫名其妙的，RNA可能就提不好，但是不能只看仪器测的浓度，比值啥的，反转录下能出结果就行。

嗯，不能太盲目相信仪器。谢谢。

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19楼2018-02-21 12:29:58
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Korea??

新虫 (正式写手)
有时候回看自己失败的实验求助都有新收获

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20楼2018-02-21 12:32:16
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