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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 总RNA提取，还是不干净，求助
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Korea??

新虫 (正式写手)

[交流] 总RNA提取，还是不干净，求助已有15人参与

今天提取RNA，尽管已经很小心，但是还是不干净。是蛋白质污染还是DNA污染呢？第一张彩图是RNA电泳第二个样品的25S、18S和5S算可以分清了，可是合成cDNA后做PCR，还是什么都没PC出来，我用RNA也一起做了PCR，没P出条带，是不是说明没有DNA污染呢？谁来救救我啊

总RNA提取，还是不干净，求助


总RNA提取，还是不干净，求助-1


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1楼2018-02-06 18:43:22
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Korea??

新虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 沐枫之城 at 2018-02-21 00:11:32
看图来说RNA提取的应该没问题，完全可以用来做RT-PCR的，个人感觉你的问题应该是反转没有成功，你先按照其他人说的反转扩下actin基因啥的看能不能扩出来

是的，我又重复了一遍，发现上次应该是少了一个试剂(primer).谢谢您的关注！

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18楼2018-02-21 12:28:51
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
从第一张看RNA降解了，直接以RNA去P的话很难成功这个正常。
建议你把cDNA跑个电泳看看

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2楼2018-02-06 19:08:33
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
drwhoknowss: 金币+2, 鼓励交流 2018-02-07 03:34:29
看起来像是有点降解，跑胶的时候换新鲜的电泳液，另外少加点样，再跑一次。反转录后的cDNA建议用actin引物跑一下，看能不能扩增出片段，如果actin引物都扩增不出来，说明反转录不成功。如果actin能跑出来，自己的基因跑不出来，说明扩增的基因在这个样本里的表达丰度比较低，比较难扩增。如果只是要扩增这个基因，可以把多个组织的样本混在一起提一个总RNA，再做反转录扩增试试。另外就是要注意引物设计的问题。
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。
3楼2018-02-06 19:48:55
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Korea??

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-02-06 19:08:33
从第一张看RNA降解了，直接以RNA去P的话很难成功这个正常。
建议你把cDNA跑个电泳看看

今天才提的RNA就降解啦…………我用RNA做PCR的目的是验证是否有DNA污染，P不出来说明没有残留DNA。cDNA电泳会怎么样？

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4楼2018-02-06 21:08:36
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