应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 总RNA提取，还是不干净，求助
52/1返回列表
查看: 6753  |  回复: 26
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

Korea??

新虫 (正式写手)

[交流] 总RNA提取，还是不干净，求助已有15人参与

今天提取RNA，尽管已经很小心，但是还是不干净。是蛋白质污染还是DNA污染呢？第一张彩图是RNA电泳第二个样品的25S、18S和5S算可以分清了，可是合成cDNA后做PCR，还是什么都没PC出来，我用RNA也一起做了PCR，没P出条带，是不是说明没有DNA污染呢？谁来救救我啊

总RNA提取，还是不干净，求助


总RNA提取，还是不干净，求助-1


发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼2018-02-06 18:43:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Korea??

新虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by whwei321 at 2018-02-10 07:06:03
感觉提的还可以，最有可能的原因是反转或者引物设计有问题



发自小木虫IOS客户端
13楼2018-02-13 23:13:52
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 27 个回答

渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
从第一张看RNA降解了，直接以RNA去P的话很难成功这个正常。
建议你把cDNA跑个电泳看看

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2018-02-06 19:08:33
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
drwhoknowss: 金币+2, 鼓励交流 2018-02-07 03:34:29
看起来像是有点降解，跑胶的时候换新鲜的电泳液，另外少加点样，再跑一次。反转录后的cDNA建议用actin引物跑一下，看能不能扩增出片段，如果actin引物都扩增不出来，说明反转录不成功。如果actin能跑出来，自己的基因跑不出来，说明扩增的基因在这个样本里的表达丰度比较低，比较难扩增。如果只是要扩增这个基因，可以把多个组织的样本混在一起提一个总RNA，再做反转录扩增试试。另外就是要注意引物设计的问题。
赞一下(5人) 回复此楼
。
3楼2018-02-06 19:48:55
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Korea??

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-02-06 19:08:33
从第一张看RNA降解了，直接以RNA去P的话很难成功这个正常。
建议你把cDNA跑个电泳看看

今天才提的RNA就降解啦…………我用RNA做PCR的目的是验证是否有DNA污染，P不出来说明没有残留DNA。cDNA电泳会怎么样？

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2018-02-06 21:08:36
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 27 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件) 论文翻译-EnPapers美助理教授团队-SCI英文润色
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 导师不让硕转博，让我去国外读博，能理解吗？ +7 萧山幽谷 2024-05-29 11/550 2024-05-29 16:43 by crazy peng
[基金申请] 讨论贴：好本子一定会被打招呼的淘汰吗 +31 ioe3937 2024-05-27 41/2050 2024-05-29 15:15 by zhangjxnu
[论文投稿] 共同通讯谁投稿？ +3 qvhm2609 2024-05-23 11/550 2024-05-29 14:52 by a50044758
[硕博家园] 好奇博士每天学习的有效时间 +8 hahamyid 2024-05-25 9/450 2024-05-29 13:36 by zyqchem
[考博] 招聘催化、储能博士 +8 dfjsf 2024-05-24 12/600 2024-05-29 11:23 by one time
[考博] 24年博士招生 +6 abinit432 2024-05-27 7/350 2024-05-29 11:19 by 我是wink啊
[教师之家] 在大地上我们只过一生---看完我的阿勒泰上头了好几天，完结那天晚上几乎失眠 +8 瞬息宇宙 2024-05-27 9/450 2024-05-29 08:39 by wangwei4034
[基金申请] 如果您是国自然评审专家 +3 丁香园账户 2024-05-28 3/150 2024-05-29 06:44 by gaohui8888
[有机交流] D-阿拉伯糖-1，4-内酯的合成 2+4 Leeu55 2024-05-24 12/600 2024-05-28 21:17 by Leeu55
[硕博家园] 文科博在木虫上存在感好低呀 +8 hahamyid 2024-05-25 11/550 2024-05-28 15:28 by cqu_zzh
[论文投稿] EI期刊审稿人邮箱问题 5+3 shier妈妈 2024-05-27 4/200 2024-05-28 14:53 by topedit
[基金申请] 河北省基金 50+3 晓晓爱翠翠 2024-05-23 24/1200 2024-05-28 14:49 by 晓晓爱翠翠
[论文投稿] Neurocomputing 外审结束 +7 mollyzhang_2003 2024-05-23 7/350 2024-05-28 13:53 by keyaner23
[基金申请] 基金上会 +14 mrKiller 2024-05-25 20/1000 2024-05-28 10:11 by bnullh
[基金申请] 面上基金会评专家，有回避机制吗？ +4 huang1991js 2024-05-27 4/200 2024-05-27 19:08 by 星火12
[考博] 25博士申请 +5 1872075 2024-05-25 7/350 2024-05-27 18:52 by FERGUSKB
[基金申请] 函评什么时候结束 +9 阿呆不呆 2024-05-23 10/500 2024-05-27 15:51 by zsy4657608
[教师之家] 研究生在毕业答辩时挂了，遗憾 +7 spacr2022 2024-05-27 10/500 2024-05-27 12:45 by 懒羊羊2024
[基金申请] 感觉自然基金限制通过比例就是有点扯，学学B口，化学学部，不限制比例。 +10 wsjing 2024-05-26 14/700 2024-05-27 11:57 by kanmiaolucky
[硕博家园] 研0 +6 控制调剂yl 2024-05-25 11/550 2024-05-26 23:37 by sakuraai
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭