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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 点突变半年了还没出来。。求助。。
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
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引用回帖:
20楼: Originally posted by eloi2017 at 2018-01-31 16:22:21
没有overhang是不是只对T载体有影响？转化加了阳性对照，长了。。...

pcr产物都是平端连接，有一个碱基overhang影响效率。
那最合理就是连接的问题了。我觉得你连接前要纯化，否则buffer不对，而且很多引物二聚体，影响效率
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
21楼2018-01-31 21:06:01
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eloi2017

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
21楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-01-31 21:06:01
pcr产物都是平端连接，有一个碱基overhang影响效率。
那最合理就是连接的问题了。我觉得你连接前要纯化，否则buffer不对，而且很多引物二聚体，影响效率...

是的，总觉得是连接的问题，可是连接又没有什么可优化的地方，换了新酶，16度过夜，还试过4度2天和RT 2小时，都没啥区别。。之前有次纯化完啥都没有。。这次用一半纯化了，但是浓度非常低。。看明天长不长了。。谢谢！
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22楼2018-02-01 23:25:57
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lixinlihu

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
定点突变，直接一步全质粒突变！效果100

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23楼2018-02-10 09:01:18
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