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drwhoknowss

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20楼: Originally posted by eloi2017 at 2018-01-31 16:22:21
没有overhang是不是只对T载体有影响?转化加了阳性对照,长了。。...

pcr产物都是平端连接,有一个碱基overhang影响效率。
那最合理就是连接的问题了。我觉得你连接前要纯化,否则buffer不对,而且很多引物二聚体,影响效率
Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
21楼2018-01-31 21:06:01
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eloi2017

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
21楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-01-31 21:06:01
pcr产物都是平端连接,有一个碱基overhang影响效率。
那最合理就是连接的问题了。我觉得你连接前要纯化,否则buffer不对,而且很多引物二聚体,影响效率...

是的,总觉得是连接的问题,可是连接又没有什么可优化的地方,换了新酶,16度过夜,还试过4度2天和RT 2小时,都没啥区别。。之前有次纯化完啥都没有。。这次用一半纯化了,但是浓度非常低。。看明天长不长了。。谢谢!
22楼2018-02-01 23:25:57
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lixinlihu

金虫 (正式写手)


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23楼2018-02-10 09:01:18
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