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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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eloi2017

新虫 (初入文坛)

[交流] 点突变半年了还没出来。。求助。。 已有4人参与

要突变启动子上一个位点，试了酶切连接，NEB的HiFi Assembly，定点突变，用过TOP10F'和NEB 10ß做转化，每次不是不长就是WT。。

比如这次，俩片断PCR完了跑胶看没问题，俩片断和质粒酶切完胶回收也都ok，然后连接完长出来还是WT。。想不明白这WT是哪儿来的，按说体系里应该没有了啊。。

求各位大神指点迷津。。
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1楼 2018-01-30 16:50:50
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awaken2013

铜虫 (小有名气)
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引用回帖:
7楼: Originally posted by eloi2017 at 2018-01-30 19:22:48
您是指用一对方向相反的引物扩整个质粒么？试过几次，出来都全是WT。。有一次加了dpnI消化，结果什么也没长。。您有什么好建议么？谢谢您！...

dpn1肯定要加 你pcr没做好 引物 条件

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9楼2018-01-30 20:27:51
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712345678

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我觉得你切的有问题。嘿嘿。我也不懂

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2楼2018-01-30 17:16:14
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eloi2017

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 712345678 at 2018-01-30 17:16:14
我觉得你切的有问题。嘿嘿。我也不懂

能有什么问题呢？条带出来是对的啊。。
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3楼2018-01-30 17:32:56
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712345678

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你都切过了，条带里面的顺序肯定不一样啊

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4楼2018-01-30 17:35:27
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