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点突变半年了还没出来。。求助。。已有4人参与
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要突变启动子上一个位点，试了酶切连接，NEB的HiFi Assembly，定点突变，用过TOP10F'和NEB 10ß做转化，每次不是不长就是WT。。 比如这次，俩片断PCR完了跑胶看没问题，俩片断和质粒酶切完胶回收也都ok，然后连接完长出来还是WT。。想不明白这WT是哪儿来的，按说体系里应该没有了啊。。 求各位大神指点迷津。。 |
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awaken2013
铜虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-01-31 11:48:36
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drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-01-31 11:48:36
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特异性不知道 降低循环数少于10 调整退火温度 dpn1 处理2小时 过夜连接 突变我都不知道做了几百个 关键摸准退火温度 发自小木虫IOS客户端 |
12楼2018-01-30 21:16:54
。嘿嘿。我也不懂2楼2018-01-30 17:16:14
3楼2018-01-30 17:32:56
4楼2018-01-30 17:35:27