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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化农杆菌检测不到
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一颗心路过一张�

新虫 (初入文坛)

[求助] 转化农杆菌检测不到 已有1人参与

测过序的质粒，冻融法转化GV3101，两天菌落长得很好，先挑斑摇菌，都好着，但pcr检测p不出来，同时做了6个基因，都是这样，不知道是怎么了，求大神指点

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1楼 2018-01-28 21:29:21
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遊俠

新虫 (小有名气)
测过序后放了多久呢？可以试着提一下质粒看看，如果能提出来可以扩一下看看

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2楼2018-01-28 22:06:26
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一颗心路过一张�

新虫 (初入文坛)
测序一个星期，应该不会有问题吧

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3楼2018-01-28 22:24:40
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我没做过冻融法，但是农杆菌破壁比较困难，用普通的菌落PCR程序比较难。你可以试试专门破完壁再做PCR。

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4楼2018-01-28 22:32:41
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吃泡菜的团子

新虫 (初入文坛)
可以先挑一半单菌落加100ul入水中，然后96度7min,震荡离心取5ul作为PCR模版。这样质粒基本可以彻底破壁。

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5楼2018-01-29 05:57:36
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