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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 用离子交换层析纯化酵母系统表达蛋白，蛋白样品应如何处理？
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sj565523883

铜虫 (初入文坛)

[求助] 用离子交换层析纯化酵母系统表达蛋白，蛋白样品应如何处理？ 已有3人参与

用离子交换层析纯化酵母系统表达蛋白，之前做离子交换层析都是将菌液离心后，直接上样了。用的是弱阳离子交换柱，没有挂柱，求助有没有特别详细的对于前期样品处理以及做层析纯化的步骤。跪求各位大神指点。
样品预测的pi为8.7 ，文献上是用CM或SP柱
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1楼 2018-01-23 16:28:08
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家

【答案】应助回帖

你之前没有挂住有可能你在上样前样品没有处理好，离子强度电导太大；或者缓冲液不合适。建议你上样前用脱盐等适当降低电导。后面的过阳离子柱子，用配好的Tris-HCl缓冲液（pH＜8），按照平衡、上样、淋洗、洗脱（洗脱液在平衡液中加Nacl）的步骤操作就行。
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3楼2018-02-23 09:32:34
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个pI的适合用强阳的，酵母离心后，测下电导和pH，把pH调到合适的数值，然后电导太高了就要透析或者凝胶过滤置换缓冲液，然后浓度太低了可以先浓缩一下，就可以过离子交换柱了。
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2楼2018-01-24 14:47:35
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qpeng1983

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

估计是电导率太高了吧，脱盐或者直接稀释后，试一下能否挂上柱子。
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4楼2018-02-24 11:45:05
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