应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 用离子交换层析纯化酵母系统表达蛋白，蛋白样品应如何处理？
41/1返回列表
查看: 1084  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sj565523883

铜虫 (初入文坛)

[求助] 用离子交换层析纯化酵母系统表达蛋白，蛋白样品应如何处理？ 已有3人参与

用离子交换层析纯化酵母系统表达蛋白，之前做离子交换层析都是将菌液离心后，直接上样了。用的是弱阳离子交换柱，没有挂柱，求助有没有特别详细的对于前期样品处理以及做层析纯化的步骤。跪求各位大神指点。
样品预测的pi为8.7 ，文献上是用CM或SP柱
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-01-23 16:28:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个pI的适合用强阳的，酵母离心后，测下电导和pH，把pH调到合适的数值，然后电导太高了就要透析或者凝胶过滤置换缓冲液，然后浓度太低了可以先浓缩一下，就可以过离子交换柱了。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2018-01-24 14:47:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家

【答案】应助回帖

你之前没有挂住有可能你在上样前样品没有处理好，离子强度电导太大；或者缓冲液不合适。建议你上样前用脱盐等适当降低电导。后面的过阳离子柱子，用配好的Tris-HCl缓冲液（pH＜8），按照平衡、上样、淋洗、洗脱（洗脱液在平衡液中加Nacl）的步骤操作就行。
赞一下 回复此楼
3楼2018-02-23 09:32:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qpeng1983

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

估计是电导率太高了吧，脱盐或者直接稀释后，试一下能否挂上柱子。
赞一下 回复此楼
4楼2018-02-24 11:45:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sj565523883 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭