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求助制备感受态细胞DH5a
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我用TSS法制备感受态细胞DH5a，制备了几次都不好用。阳性质粒转化都没有长出菌落来。 请教，问题会出在哪里呢？我制备的方法如下，请大家帮忙看一下。多谢 1.取感受态种子接种于含有LB的2ml试管中，37度振荡培养 2.将上述培养液用LB按1：100稀释后，37度振荡约3h（OD为0.5±0.03） 3.把培养物放在冰上冷却后，2500rpm 4度离心10min，收集菌体，弃上清 4.使用前准备好1X TSS(10% W/V PEG 3350, 50mM MgCl2, 85%LB) 5.将收集到的菌体重悬于1X TSS（每100ml 培养物溶解于10ml 的1X TSS）, 混 匀。注意保持冰上操作 6.用1.5ml EP管冰上分装，200μL/管，后放于-70保存 |
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