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心死后死心

铜虫 (初入文坛)

[求助] 转化问题 已有1人参与

请教一下  有人把6000多bp的质粒导入过DH5α   感受态吗？化转法  30感受态+1质粒 冰水浴30min  42度90s  冰水浴2min  无抗培养基复苏40min 30微涂板   18小时都没有长出来

@youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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1楼 2018-01-13 15:33:52
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1006641214

木虫 (正式写手)

wublab
关键在热击这一步

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你好
2楼2018-01-13 15:38:37
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昨夜雪寒

新虫 (初入文坛)
关键是你转化过程中手法怎么样，全程不能用枪吹吸的，不然感受态菌就都死了

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3楼2018-01-13 16:31:53
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莫落

木虫 (正式写手)
效率是不是太低了，下次多涂一点

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4楼2018-01-13 18:06:29
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keyangbin

铜虫 (小有名气)
第一，感受态细胞的量是30ul吗？如果是就太少？一般要100ul，转10  ul的质粒水稀释液，质粒量10ng到50ng左右。二，复苏后涂板是都涂对质粒抗性的平板。

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5楼2018-01-13 19:36:27
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+200 2018-01-24 08:34:09
silicare: 金币+100 2018-01-24 08:34:18
1. 42度，一般30-45秒。你那个基本烫死了
2. 一般长菌要等16个小时
3. 阳性对照很重要！！！同时做一个已知好用质粒的转化，如果有菌就排除是感受态问题。
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
6楼2018-01-13 22:07:59
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