应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白洗涤过程中出现蛋白变性的问题
41/1返回列表
查看: 703  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

LMN2012

银虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白洗涤过程中出现蛋白变性的问题 已有3人参与

最近，利用大肠杆菌系统表达了一个50多KDa的蛋白，通过对超声后的上清和沉淀分别进行电泳发现，目标蛋白绝大多数都在沉淀中，怀疑是包涵体形式表达，可是利用实验室常用的包涵体清洗液ph9.5(氯化钠，edta，tris，triton x-100，尿素)对沉淀进行洗涤离心后，溶液中大部分沉淀结成硬块，极少部分可以溶解，有少量蛋白存在，这样看是蛋白在洗涤过程中变性了，可是变性的原因不清楚，请大神提点下。

@gyesang @hc-material 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-01-12 22:01:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoxiao1993

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

大肠杆菌被研究的很透彻，但是大肠杆菌表达系统大都是胞内表达，当蛋白分泌过多时会形成包涵体，你的怀疑很有道理，你可以尝试把基因转到芽孢杆菌营养缺陷菌株里面，表达的就成了胞外蛋白了，你也可以改造一下大肠杆菌，让胞内分泌到胞外，（纤维素酶作为融合蛋白在大肠杆菌中的应用及其分泌机制的研究）你可以参考一下这篇文献，总体上应该仔细查一下你的蛋白是分泌的形式再做决定。
赞一下 回复此楼
2楼2018-11-08 10:03:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

尿素就是让蛋白变性溶解，溶解时加还原剂打开二硫键
赞一下 回复此楼
3楼2018-11-08 10:25:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

503276866

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是不是尿素浓度太低，包涵体没有溶解形成的硬块，可能不是蛋白变性的原因，你测试下看看
赞一下 回复此楼
没有最好只有更好
4楼2018-11-21 14:34:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 LMN2012 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 11/550 2026-03-23 23:29 by 呆呆师姐
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +4 谷雨上岸 2026-03-23 5/250 2026-03-23 21:18 by 不惑可乐
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 316求调剂 +7 梁茜雯 2026-03-19 7/350 2026-03-23 16:21 by lingjue
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap－ 2026-03-22 9/450 2026-03-23 12:57 by yqdszhdap－
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 085600材料与化工306 +4 z1z2z3879 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:44 by ms629
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 0805 316求调剂 +3 大雪深藏 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:55 by 学员8dgXkO
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 279求调剂 +5 红衣隐官 2026-03-21 5/250 2026-03-21 14:59 by lature00
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭