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LMN2012

银虫 (初入文坛)

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[求助] 蛋白洗涤过程中出现蛋白变性的问题已有3人参与

最近，利用大肠杆菌系统表达了一个50多KDa的蛋白，通过对超声后的上清和沉淀分别进行电泳发现，目标蛋白绝大多数都在沉淀中，怀疑是包涵体形式表达，可是利用实验室常用的包涵体清洗液ph9.5(氯化钠，edta，tris，triton x-100，尿素)对沉淀进行洗涤离心后，溶液中大部分沉淀结成硬块，极少部分可以溶解，有少量蛋白存在，这样看是蛋白在洗涤过程中变性了，可是变性的原因不清楚，请大神提点下。

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1楼 2018-01-12 22:01:28

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xiaoxiao1993

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

大肠杆菌被研究的很透彻，但是大肠杆菌表达系统大都是胞内表达，当蛋白分泌过多时会形成包涵体，你的怀疑很有道理，你可以尝试把基因转到芽孢杆菌营养缺陷菌株里面，表达的就成了胞外蛋白了，你也可以改造一下大肠杆菌，让胞内分泌到胞外，（纤维素酶作为融合蛋白在大肠杆菌中的应用及其分泌机制的研究）你可以参考一下这篇文献，总体上应该仔细查一下你的蛋白是分泌的形式再做决定。