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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白洗涤过程中出现蛋白变性的问题
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LMN2012

银虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白洗涤过程中出现蛋白变性的问题 已有3人参与

最近，利用大肠杆菌系统表达了一个50多KDa的蛋白，通过对超声后的上清和沉淀分别进行电泳发现，目标蛋白绝大多数都在沉淀中，怀疑是包涵体形式表达，可是利用实验室常用的包涵体清洗液ph9.5(氯化钠，edta，tris，triton x-100，尿素)对沉淀进行洗涤离心后，溶液中大部分沉淀结成硬块，极少部分可以溶解，有少量蛋白存在，这样看是蛋白在洗涤过程中变性了，可是变性的原因不清楚，请大神提点下。

@gyesang @hc-material 发自小木虫Android客户端
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1楼 2018-01-12 22:01:28
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xiaoxiao1993

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

大肠杆菌被研究的很透彻，但是大肠杆菌表达系统大都是胞内表达，当蛋白分泌过多时会形成包涵体，你的怀疑很有道理，你可以尝试把基因转到芽孢杆菌营养缺陷菌株里面，表达的就成了胞外蛋白了，你也可以改造一下大肠杆菌，让胞内分泌到胞外，（纤维素酶作为融合蛋白在大肠杆菌中的应用及其分泌机制的研究）你可以参考一下这篇文献，总体上应该仔细查一下你的蛋白是分泌的形式再做决定。
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2楼2018-11-08 10:03:10
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

尿素就是让蛋白变性溶解，溶解时加还原剂打开二硫键
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3楼2018-11-08 10:25:31
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503276866

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是不是尿素浓度太低，包涵体没有溶解形成的硬块，可能不是蛋白变性的原因，你测试下看看
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没有最好只有更好
4楼2018-11-21 14:34:51
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