应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 分子生物学、蛋白表达
52/1返回列表
查看: 2005  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

吐司布丁7

新虫 (初入文坛)

[求助] 分子生物学、蛋白表达 已有3人参与

求助各位大神，最近用BL21表达pET系列重组质粒，用溶菌酶破碎细菌，但是离心之后，SDS-PAGE电泳结果显示上清没有蛋白条带，沉淀里有，课题组的师兄师姐的又没有问题，这是什么情况啊？感谢各位的指点
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2018-01-12 17:09:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

超级小小龙

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
11楼2018-02-20 10:35:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2018-01-12 17:30:44
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-02-22 08:15:21
你反应的条件是啥，LB？还是M9？还是别的，温度，诱导条件（IPTG浓度，诱导时间）每个样本都可能不一样，要具体看，如果是30度培养诱导3小时，可以降低到16到18度，诱导24小时，还有IPTG浓度，从高到低0.6-0.1等，除了这些，培养基也有好些种，每种也不一样。此外，BL21之外还可以用其他的菌株（Rosetta 2），本身DH5a也可以试一试。如果不行，再换载体，pET15，21，28等等。总之，需要条件摸索
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2018-01-12 18:10:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吐司布丁7

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 18840843935 at 2018-01-12 17:30:44
改变诱导条件试试，就是优化一下条件，诱导剂浓度低一点，温度低一点什么的，目的是慢慢的表达，然后好有时间折叠表达出可溶蛋白

诱导条件是：IPTG的终浓度0.1mM，16℃、120rpm,14-16h。
主要是上清几乎没有任何条带，这个跟蛋白表达的诱导条件关系大吗?就算我的目的蛋白没有表达，也应该有一些菌体自身的蛋白条带才对吧？
赞一下 回复此楼
4楼2018-01-12 20:35:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭