| 查看: 1063 | 回复: 2 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
基因片段连接pET28
|
||
|
求助 我用T4连接酶连接1.7kb的片段（30ng/μL）和pET28a（27ng/μL），亚克隆片段取1μg双酶切（EcoR1和Xho1,EcoR1和Sal1，换了两对引物）3-4小时后胶回收，载体双酶切过夜后胶回收，连接16度过夜，然后做转化，长出来的单菌落不超过10个，但是跑菌落PCR后目的条带很浅，挑菌在5mL LB中摇过夜，但是我提出来的质粒浓度很高，几乎两百以上，pET28是低拷贝，正常我师姐提出来就100左右，跑胶后能看到明显的杂质，然后双酶切或单酶切后都没有目的条带，只看到五千附近的一条带，可能是载体。然后我又用同源重组的方法，重新设计引物，但是长出来的单菌落就三四个，还是挑不出阳性菌落，重复了好几次，还是做不出来，求助求助求助 @gyesang 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有9人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有72人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有26人回复
-
我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人
已经有16人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有12人回复
-
招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师
已经有3人回复
-
时间戳又变了8-15
已经有23人回复
-
filecode=后面第一个是大写字母
已经有7人回复
-
filecode
已经有12人回复
-
小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊
已经有13人回复
3楼2018-03-15 16:54:33
2楼2018-01-09 21:36:52
