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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 实时荧光定量PCR扩增产物大小
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大鱼和珊瑚

新虫 (初入文坛)

[求助] 实时荧光定量PCR扩增产物大小 已有1人参与

使用荧光染料法的实时荧光定量PCR的产物可以300bp以上吗？

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1楼 2018-01-09 20:33:11
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辛雨237

铁杆木虫 (著名写手)
有点长了

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春暖花开
2楼2018-01-09 22:54:57
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kshdd

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
500以下没有问题
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3楼2018-01-09 22:55:14
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Liumengya

木虫 (正式写手)
不是一般建议100左右吗？(?￣?^￣??) 嫌弃你

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4楼2018-01-10 00:23:12
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wzt1417

新虫 (小有名气)
80-180比较好

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5楼2018-01-10 00:41:52
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大鱼和珊瑚

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kshdd at 2018-01-09 22:55:14
500以下没有问题

我之前看以前的帖子说针对荧光染料法，其实扩增产物的长短没有一定要300bp以下，之所以300bp以下只是为了可以高效率，高灵敏度。
不知道对不对

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6楼2018-01-11 19:05:47
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大鱼和珊瑚

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kshdd at 2018-01-09 22:55:14
500以下没有问题

我的扩增产物是302bp，退火温度是66度，为了可以提高一下扩增效率，所以我的72度延伸时间定了2分钟，45个循环，不知道对不对
新手上路，求指教

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7楼2018-01-11 19:10:52
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kshdd

金虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 大鱼和珊瑚 at 2018-01-11 19:10:52
我的扩增产物是302bp，退火温度是66度，为了可以提高一下扩增效率，所以我的72度延伸时间定了2分钟，45个循环，不知道对不对
新手上路，求指教
...

一般推荐的是100-200bp，但有时候实验设计会不尽人意，所以500bp也是可以的，有文献就用到590bp；另外，关于延伸时间，现在的聚合酶的扩增效率为1min是1000bp，所以你可以根据你的片段长度进行换算，若是定量的话，我感觉72℃ 30s就可以了。
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8楼2018-01-11 20:58:48
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kshdd

金虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 大鱼和珊瑚 at 2018-01-11 19:05:47
我之前看以前的帖子说针对荧光染料法，其实扩增产物的长短没有一定要300bp以下，之所以300bp以下只是为了可以高效率，高灵敏度。
不知道对不对
...

可以这么理解。多看看资料，做几次就知道了
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9楼2018-01-11 21:01:09
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大鱼和珊瑚

新虫 (初入文坛)
我试试，谢谢了

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10楼2018-01-11 23:14:47
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